利索能及
我要发布
收藏
专利号: 201910772324X
申请人: 南京师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-18
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种含硫苷键糖胺聚糖的制备方法,其特征在于,反应路线如下:

第一步,即步骤a:将1.5mmol尿苷二磷酸4-位巯基2-位酰胺基葡萄糖糖基供体化合物(I)、1.2mmol化合物(X)和20μg/mL糖基转移酶PmHS2在缓冲溶液中室温下反应15小时,所述缓冲溶液为含有15mmol MnCl2,25mmol、pH 7.2的Tris,10mM DTT和10mL水,反应通过HPLC进行监测,产物通过C18反相柱分离,得到化合物(XI);

第二步,即步骤b:将1.2mmol化合物(XI)、1.5mmol葡萄糖醛酸糖基供体(XII)和20μg/mL糖基转移酶PmHS2在缓冲溶液中室温下反应15小时,所述缓冲溶液含有15mmol MnCl2,

25mmol、pH 7.2的Tris,10mM DTT和10mL水,反应通过HPLC进行监测,产物通过C18反相柱分离,得到化合物(XIII);

第三步,重复步骤a和步骤b:将化合物(XIII)经过糖基转移酶PmHS2催化尿苷二磷酸4-位巯基2-位酰胺基葡萄糖糖基供体化合物(I),然后经过糖基转移酶PmHS2催化尿苷二磷酸葡萄糖醛酸供体化合物(XII),重复n次,其中,n为从1到100的自然数,因而得到的含硫苷键胺聚糖(XIV)是一系列结构类似的化合物,糖链长度随着数值n不同而变化,得到含硫苷键胺聚糖(XIV)。

2.根据权利要求1所述的一种含硫苷键糖胺聚糖的制备方法,其特征在于:所述糖基转移酶为PmHS2、PmHS1、PmCS、PmHA、KfiA、KfiC、KfoC或β3GnT。

3.根据权利要求1所述的一种含硫苷键糖胺聚糖的制备方法,其特征在于:所述化合物(X)为糖胺聚糖衍生物的寡糖或多糖,在糖链非还原端为葡萄糖醛酸,糖胺聚糖衍生物包括肝素、硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、角质素或透明质酸。

4.根据权利要求1所述的一种含硫苷键糖胺聚糖的制备方法,其特征在于:所述第一步中尿苷二磷酸4-位巯基2-位酰胺基葡萄糖糖基供体化合物(I)可以用尿苷二磷酸4-位巯基

2-位酰胺基半乳糖糖基供体(II)替代。

5.根据权利要求4所述的一种含硫苷键糖胺聚糖的制备方法,其特征在于:所述第一步中尿苷二磷酸4-位巯基2-位酰胺基葡萄糖糖基供体化合物其结构通式为式(I),所述尿苷二磷酸4-位巯基2-位酰胺基半乳糖糖基供体化合物其结构通式为式(II)优选地,4-位巯基的构型是平伏键或直立键;

优选地,在通式(I)和(II)中:

糖基供体为二磷酸形式或二磷酸盐形式,具体为钠盐、钾盐、铵盐、三乙胺盐或吡啶盐;

R1=CH3、CF3、CH2-CH3、CH=CH2、C≡CH、CH2N3或CH2CH2N3。

6.根据权利要求5所述的一种含硫苷键糖胺聚糖的制备方法,其特征在于,所述式(I)的合成路线如下:

第一步:将520mg、1mmol化合物(III)溶解在5mL DCM和0.5mL吡啶中,在-10℃下加入

0.34mL、2mmol三氟甲磺酸酐,搅拌2小时,Rf=0.6的TLC检测,所述TLC由体积比石油醚:乙酸乙酯=3:1组成,反应完全,向反应液中加入20mL乙酸乙酯,分别使用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤,有机层用无水硫酸钠干燥,浓缩得化合物(IV),所述化合物(IV)的浓缩物不经过纯化,直接进行下一步;

第二步:将化合物(IV)的浓缩物溶解在5mL DMF中,加入340mg、3mmol硫氰化钾,室温下搅拌5小时,Rf=0.6的TLC检测,所述TLC由体积比石油醚:乙酸乙酯=3:1组成,反应完全后向反应液中加入20mL乙酸乙酯,分别使用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤,有机层用无水硫酸钠干燥,浓缩,经体积比石油醚:乙酸乙酯=4:1的硅胶柱层析纯化得到黄色油状化合物(V)360mg,第一步和第二步两总产率为67%;

第三步:将207mg、0.38mmol化合物(V)溶解在5mL DCM中,加入136mg、0.84mmol三氯化铁,室温下搅拌5小时,Rf=0.5的TLC检测,所述TLC由体积比石油醚:乙酸乙酯=2:1组成,反应完全后向反应液中加入15mL DCM,分别使用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤,有机层用无水硫酸钠干燥,浓缩得化合物(VI);

第四步:将化合物(VI)的浓缩物溶解在5mL THF中,所述5mL THF中含有0.42mL、2M N,N-二异丙基胺锂LDA溶液,降温至-78℃,该温度下搅拌0.5小时,然后在-78℃加入[(BnO)

2PO]2,并搅拌3小时,Rf=0.4的TLC检测,所述TLC由体积比石油醚:乙酸乙酯=2:1组成,反应完全后向反应液中加入饱和碳酸氢铵溶液淬灭反应,再加入15mL乙酸乙酯,分别使用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤,有机层用无水硫酸钠干燥,浓缩,经体积比石油醚:乙酸乙酯=3:1硅胶柱层析,纯化得到黄色油状化合物(VII)198mg,第三步和第四步两步总产率73%;

第五步:将100mg、0.13mmol化合物(VII)溶解在10mL甲醇中,加入10mg钯碳,室温常压下通入氢气0.5小时,Rf=0.4的TLC检测,所述TLC由体积比石油醚:乙酸乙酯=2:1组成,反应完全后浓缩有机溶剂得化合物(VIII),所述化合物(VIII)的浓缩物不经过纯化,直接进行下一步;

第六步:将化合物(VIII)的浓缩物溶解在10mL吡啶中,加入40mg、0.5mmol四氮唑和

140mg、0.2mmol的UMP morpholidate,常温下反应24小时,浓缩有机溶剂,经P-2凝胶柱层析,层析用后水淋洗,冻干馏分得到白色固体化合物(IX)70mg,第五步和第六步两步总产率

58%;

第七步:将60mg、0.07mmol化合物(IX)溶解在5mL甲醇中,所述5mL甲醇中含有0.2mL、

5.5M甲醇钠溶液,室温下反应12小时,用Dowex 50WX8酸性树脂中和,浓缩有机溶剂,经P-2凝胶柱层析,层析后用水淋洗,冻干馏分得到白色固体产物化合物(I)20mg,产率55%。

7.根据权利要求5所述的一种含硫苷键糖胺聚糖的制备方法,其特征在于,所述式(II)的合成路线如下:第一步:将520mg、1mmol化合物(XV)溶解在5mL DCM和0.5mL吡啶中,在-10℃下加入

0.34mL、2mmol三氟甲磺酸酐,搅拌2小时,Rf=0.6的TLC检测,所述TLC由体积比石油醚:乙酸乙酯=3:1组成,反应完全后向反应液中加入20mL乙酸乙酯,分别使用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤,有机层用无水硫酸钠干燥,浓缩得化合物(XVI),所述化合物(XVI)的浓缩物不经过纯化,直接进行下一步;

第二步:将化合物(XVI)的浓缩物溶解在5mL DMF中,加入340mg、3mmol硫氰化钾,室温下搅拌5小时,Rf=0.6的TLC检测,所述TLC由体积比石油醚:乙酸乙酯=3:1组成,反应完全后向反应液中加入20mL乙酸乙酯,分别使用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤,有机层用无水硫酸钠干燥,浓缩,经体积比石油醚:乙酸乙酯=4:1的硅胶柱层析纯化得到黄色油状化合物(XVII)360mg,第一步和第二步两总产率为67%;

第三步:将207mg、0.38mmol化合物(XVII)溶解在5mL DCM中,加入136mg、0.84mmol三氯化铁,室温下搅拌5小时,Rf=0.5的TLC检测,所述TLC由体积比石油醚:乙酸乙酯=2:1组成,反应完全后向反应液中加入15mL DCM,分别使用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤,有机层用无水硫酸钠干燥,浓缩得化合物(XVIII),化合物(XVIII)的浓缩物不经过纯化,直接进行下一步;

第四步:将化合物(XVIII)的浓缩物溶解在5mL THF中,所述5mL THF中含有0.42mL、2M N,N-二异丙基胺锂LDA溶液,降温至-78℃,该温度下搅拌0.5小时,然后在-78℃加入[(BnO)2PO]2,并搅拌3小时,Rf=0.4的TLC检测,所述TLC由体积比石油醚:乙酸乙酯=2:1组成,反应完全后向反应液中加入饱和碳酸氢铵溶液淬灭反应,再加入15mL乙酸乙酯,分别使用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤,有机层用无水硫酸钠干燥,浓缩,经体积比石油醚:乙酸乙酯=3:1硅胶柱层析,纯化得到黄色油状化合物(XIX)198mg,第三步和第四步两步总产率73%;

第五步:将100mg、0.13mmol化合物(XIX)溶解在10mL甲醇中,加入10mg钯碳,室温常压下通入氢气0.5小时,Rf=0.4的TLC检测,所述TLC由体积比石油醚:乙酸乙酯=2:1组成,反应完全后浓缩有机溶剂得化合物(XX),所述化合物(XX)的浓缩物不经过纯化,直接进行下一步;

第六步:将化合物(XX)的浓缩物溶解在10mL吡啶中,加入40mg、0.5mmol四氮唑和

140mg、0.2mmol的UMP morpholidate,常温下反应24小时,浓缩有机溶剂,经P-2凝胶柱层析,层析用后水淋洗,冻干馏分得到白色固体化合物(XXI)70mg,第五步和第六步两步总产率58%;

第七步:将60mg、0.07mmol化合物(XXI)溶解在5mL甲醇中,所述5mL甲醇中含有0.2mL、

5.5M甲醇钠溶液,室温下反应12小时,用Dowex 50WX8酸性树脂中和,浓缩有机溶剂,经P-2凝胶柱层析,层析后用水淋洗,冻干馏分得到白色固体产物化合物(II)20mg,产率55%。

8.权利要求1所述制备方法制备得到的含硫苷键糖胺聚糖在抗肿瘤活性方面的应用。

9.权利要求1所述制备方法制备得到的含硫苷键糖胺聚糖在抗凝血活性的应用。

10.权利要求1所述制备方法制备得到的含硫苷键糖胺聚糖在抗炎和作为靶向药物载体的应用。