1.一种基于DNA步行器诱导构象转化和信号放大的电化学发光传感器在谷胱甘肽GSH检测中的应用,其特征是:利用亲和素标记CdS:Mn量子点构建ECL信号探针,通过目标GSH将
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MnO2还原生成的Mn 催化DNA酶循环放大反应,产生DNA产物;DNA产物驱动电极上内切酶辅助的DNA步行器诱导构象转换,再进一步结合CdS:Mn‑亲和素信号探针,构建ECL传感器,对目标GSH进行ECL检测;
具体如下:
步骤1.CdS:Mn‑亲和素信号探针的合成:
取100微升CdS:Mn QDs,加入10μL 0.1M EDC和10μL 0.025M NHS活化1小时,加入20μL1 mg/mL亲和素SA于37℃反应6h;
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步骤2.GSH将MnO2还原成Mn :
20μL不同浓度的GSH与20μL MnO2纳米片混合涡旋3min,离心5min,取上清液得到不同浓
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度Mn 的溶液;
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步骤3.Mn 催化的DNA酶循环放大反应:
20mg EDC和10mg NHS加入到50μL的COOH‑MB溶液中,37℃下活化1h,加入50μL 1μM S1
37℃反应6h,再加入25μL 1μM S2反应2h形成DNA酶;磁分离去除多余的DNA,分散到170μL
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PBS;最后,取5μL上述Mn 的溶液与20μL MB‑S1‑S2溶液混合后于37℃反应80min;磁分离后,收集上清液备用;
步骤4.传感器的构建和目标检测:
ITO电极清洗晾干,Arm和Blocker A/B于37℃下反应2h保护Arm,然后6μL退火的H1和A/B按比例混合滴到纳米金修饰的ITO电极,37℃反应过夜,用1mM MCH封板2h;电极冲洗后,6μL步骤3收集的上清液和2U Nt.BbvCI加入电极反应体系中于37℃反应2h;最后与CdS:Mn‑SA探针于37℃反应1h;该电化学发光测试是将表面进行反应完成的电极作为工作电极,三电极体系中检测ECL信号;于pH 7.4、含有50mM K2S2O8的100mM PBS进行ECL检测,PMT是‑800V,电位:0~‑1.5V,扫速:100mV/ s。