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专利号: 2019106082351
申请人: 山东德图农业科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-10-22
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种褐藻胶裂解酶的培养方法,其特征在于,包括以下步骤:

S1.种子的活化

将褐藻胶裂解酶菌株的斜面培养物接种至种子培养基中,于28~32℃、120rpm条件下培养14~16h至对数生长期,得种子液;

所述种子培养基为:海藻酸钠5~8g/L,D‑山梨醇蛋白胨5~7g/L,乳化橄榄油3~5g/,酵母粉1~3g/L,NaCl30~40g/L,MgSO4·7H2O1~3g/L,K2HPO42~5g/L,FeSO4·7H2O0.01~

0.05g/L,(NH4)2SO45~8g/L,溶剂为蒸馏水;所述种子培养基的pH为7~8;

所述褐藻胶裂解酶菌株来源于中国工业微生物菌种保藏管理中心CICC,保藏编号:

23821;

S2.发酵

将所述种子液以0.2%的接种量转接发酵培养基,于28~32℃、120rpm条件下培养48h,得发酵液;

所述发酵培养基包括以下组分:酵母膏0.8~1.2g/L,蛋白胨4.5~5.5g/L,乳化橄榄油

5~7g/L,右旋糖酐L1~3g/L,柠檬酸铁0.1~0.3g/L,NaCl18~20g/L,MgCl25~7g/L,KCl0.5~0.6g/L,Na2SO43~4g/L,CaCl21.2~2.0g/L,Na2CO30.1~0.2g/L,KBr0.05~0.1g/L,SrCl232~35mg/L,H3BO321~23mg/L,NaSiO33~5mg/L,NaF2~3mg/L,NH4NO31.2~1.8mg/L,Na2HPO46~10mg/L,溶剂为蒸馏水;所述发酵培养基的pH为7~8;

S3.纯化

将所述发酵液经高速离心获取上清液,得到褐藻胶裂解酶酶液;然后将所述褐藻胶裂解酶酶液采用Bio‑GelP‑6凝胶柱,以0.2mol/L碳酸氢铵为洗脱液,流速为0.4mL/min进行洗脱,透析、干燥得褐藻胶裂解酶。

2.根据权利要求1所述的褐藻胶裂解酶的培养方法,其特征在于,步骤S1中,所述种子培养基为:海藻酸钠6g/L,D‑山梨醇蛋白胨6g/L,乳化橄榄油4g/,酵母粉2g/L,NaCl35/L,MgSO4·7H2O2g/L,K2HPO43g/L,FeSO4·7H2O0.03g/L,(NH4)2SO46g/L,溶剂为蒸馏水,pH为

7.5。

3.根据权利要求1所述的褐藻胶裂解酶的培养方法,其特征在于,步骤S2中,所述发酵培养基包括以下组分:酵母膏1g/L,蛋白胨5g/L,乳化橄榄油6g/,右旋糖酐L2g/L,柠檬酸铁

0.1g/L,NaCl19.5g/L,MgCl26g/L,KCl0.55g/L,Na2SO43.2g/L,CaCl21.8g/L,Na2CO30.16g/L,KBr0.08g/L,SrCl234mg/L,H3BO322mg/L,NaSiO34mg/L,NaF2.5mg/L,NH4NO31.6mg/L,Na2HPO48mg/L,溶剂为蒸馏水,pH为7.6。