1.一种耐高温葡萄糖异构酶,其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.一种耐高温葡萄糖异构酶突变体,由序列如SEQ ID NO:3所示的氨基酸经定点突变而来,所述突变的位点为下列中的一个或多个:(1)第17位、(2)第401位、(3)第192位、(4)第
213位。
3.如权利要求2所述的葡萄糖异构酶突变体,其特征在于所述突变体由SEQ ID NO:3所示的氨基酸将第17位、第401位、第192位和第213位中的一位、两位、三位或者四位氨基酸突变为丝氨酸、色氨酸或半胱氨酸而得。
4.如权利要求3所述的葡萄糖异构酶突变体,其特征在于所述突变体为下列之一:(1)SEQ ID NO.3所示氨基酸序列的第17位谷氨酰胺突变为丝氨酸;(2)SEQ ID NO.3所示氨基酸序列第17位谷氨酰胺突变为丝氨酸、第401位苯丙氨酸突变为色氨酸;(3)SEQ ID NO.3所示氨基酸序列第17位谷氨酰胺突变为丝氨酸、第401位苯丙氨酸突变为色氨酸,第192位苏氨酸突变为丝氨酸;(4)SEQ ID NO.3所示氨基酸序列第17位谷氨酰胺突变为丝氨酸、第401位苯丙氨酸突变为色氨酸,第192位苏氨酸突变为丝氨酸,同时第213位甘氨酸突变为半胱氨酸。
5.如权利要求2所述的葡萄糖异构酶突变体,其特征在于所述突变体氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
6.权利要求2~5之一所述的葡萄糖异构酶突变体在微生物催化D-葡萄糖异构化制备D-果糖中的应用。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述应用为:以含耐高温葡萄糖异构酶突变体基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体为酶源,以D-葡萄糖为底物,以锰盐为助剂,以Na2HPO4/NaH2PO4缓冲液为反应介质,在50~130℃,100~300r/min条件下反应,制得D-果糖。
8.如权利要求7所述的应用,其特征在于:底物初始浓度为50~700g/L,湿菌体的用量为10~50g/L,所述镁盐终浓度为5~25mM。