1.一种草鱼补体成分5多克隆抗体的制备方法,其特征在于,该方法步骤如下:
(1)以草鱼DNA为模板,利用SEQ ID NO.1所示的pET-28a-SUMO-C5-F和SEQ ID NO.2所示的pET-28a-SUMO-C5-R引物对,PCR扩增合成如SEQ ID NO.3所示的草鱼补体成分5基因片段;将纯化后的草鱼补体成分5基因片段连接至pET-28a-SUMO表达载体上以构建得到重组表达载体,将该重组表达载体导入表达大肠杆菌E.coli Rosetta中表达,纯化后获得草鱼补体成分5抗原;
(2)利用该草鱼补体成分5抗原免疫实验级日本大耳白兔,采血,收集抗血清,将抗血清纯化得到浓缩后的草鱼补体成分5多克隆抗体。
2.如权利要求1所述的一种草鱼补体成分5多克隆抗体的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中PCR扩增反应条件为95℃预变性5分钟,后接35个循环的常规PCR:94℃变性30秒、
56℃退火30秒、72℃延伸30秒,最后72℃延伸10分钟。
3.如权利要求1所述的一种草鱼补体成分5多克隆抗体的制备方法,其特征在于,所述利用该草鱼补体成分5抗原免疫实验级日本大耳白兔的过程如下:第一次免疫采用的免疫剂量为0.6mg,使用完全弗氏佐剂;12天后进行第二次免疫,使用草鱼补体成分5抗原的剂量为0.3mg,使用不完全弗氏佐剂;第一次免疫26天后进行第三次免疫,使用草鱼补体成分5抗原的剂量为0.3mg,使用不完全弗氏佐剂;第一次免疫40天后进行第四次免疫,使用草鱼补体成分5抗原的剂量为0.3mg,使用不完全弗氏佐剂。
4.如权利要求1所述的一种草鱼补体成分5多克隆抗体的制备方法,其特征在于,所述采血时间为第一次免疫后52天。
5.如权利要求1所述的一种草鱼补体成分5多克隆抗体的制备方法,其特征在于,所述将抗血清纯化是用草鱼补体成分5抗原作抗原亲和纯化。