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专利号: 2019106359487
申请人: 湖南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种pET‑28a‑SUMO‑草鱼凝血因子II蛋白抗原,其序列如SEQ ID NO.4所示。

2.一种多克隆抗体,其特征在于,该抗体是以SEQ ID NO.4所示的pET‑28a‑SUMO‑草鱼凝血因子II蛋白抗原免疫实验级日本大耳白兔后得到。

3.制备权利要求2所述的多克隆抗体的方法,其特征在于,该方法步骤如下:(1)构建含有编码pET‑28a‑SUMO‑草鱼凝血因子II蛋白的基因片段的重组表达载体,将该重组表达载体导入表达大肠杆菌中表达,纯化后获得pET‑28a‑SUMO‑草鱼凝血因子II蛋白;

(2)将该pET‑28a‑SUMO‑草鱼凝血因子II蛋白作为抗原免疫实验级日本大耳白兔,采血,收集抗血清,将抗血清纯化,浓缩,即可。

4.如权利要求3所述的多克隆抗体的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中构建过程中扩增草鱼凝血因子II基因片段所使用的引物对序列为SEQ ID NO.1所示的pET‑28a‑SUMO‑FII‑F和SEQ ID NO.2所示的pET‑28a‑SUMO‑FII‑R。

5.如权利要求3所述的多克隆抗体的制备方法,其特征在于,所述将该pET‑28a‑SUMO‑草鱼凝血因子II蛋白作为抗原免疫实验级日本大耳白兔的过程如下:第一次免疫采用的免疫剂量为0.3mg,使用完全弗氏佐剂;12天后进行第二次免疫,使用抗原的剂量为0.15mg,使用不完全弗氏佐剂;第一次免疫26天后进行第三次免疫,使用抗原的剂量为0.15mg,使用不完全弗氏佐剂;第一次免疫40天后进行第四次免疫,使用抗原的剂量为0.15mg,使用不完全弗氏佐剂。

6.如权利要求3所述的多克隆抗体的制备方法,其特征在于,所述采血时间为第一次免疫后52天。

7.如权利要求3所述的多克隆抗体的制备方法,其特征在于,所述将抗血清纯化是用pET‑28a‑SUMO‑草鱼凝血因子II蛋白抗原亲和纯化。