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专利号: 2019105008464
申请人: 大连工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于ESR技术检测蛋白中UVA‑核黄素体系对多酚氧化的方法,其特征在于,包括步骤:S1、取含有核黄素和多酚的蛋白溶液,加入自由基捕获剂POBN,得混合溶液A;所述混合溶液A中,POBN浓度为20~60mM;所述自由基捕获剂POBN为a‑(4‑吡啶基‑1‑氧)‑N‑叔丁基硝基酮;

S2、将步骤S1所述混合溶液A进行UVA照射,得混合溶液B;

S3、用毛细管吸取步骤S2所述混合溶液B,进行电子自旋共振检测;所述电子自旋共振检测的扫描条件为:中心磁场:3460~3490G;扫描宽度:50~100G;频率:9.75GHz;衰减器:

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10.00~30.00dB;功率:9.50~10.50mW;接收增益:1.00×10 ~1.00×10 ;调制频率:

100kHz;调制幅度:1.00G;相位调变:0.00deg;偏移量:0.00%;时间常数:3000.00msec~

8000.00msec;转换时间:300.00~400.00msec;

步骤S1所述含有核黄素和多酚的蛋白溶液的制备方法为:取肌原纤维蛋白用pH6、25mM磷酸盐缓冲液溶解,制备成浓度为30~60mg/mL肌原纤维蛋白溶液,加入核黄素和海带多酚,得含有核黄素和多酚的蛋白溶液;其中,以所述肌原纤维蛋白溶液中肌原纤维蛋白的总量计,每克肌原纤维蛋白添加5~150nmol核黄素,每克肌原纤维蛋白添加10~150μmol海带多酚;其中,所述25mM磷酸盐缓冲液中含有0.6M NaCl。

2.根据权利要求1所述基于ESR技术检测蛋白中UVA‑核黄素体系对多酚氧化的方法,其2

特征在于,步骤S2所述UVA照射的时间为0.5~3h,照射强度为5~10W/m。

3.根据权利要求1所述基于ESR技术检测蛋白中UVA‑核黄素体系对多酚氧化的方法,其特征在于,包括步骤:S1、从鲅鱼鱼肉中提取肌原纤维蛋白,用pH6、25mM磷酸盐缓冲液溶解,制备成50mg/mL的肌原纤维蛋白溶液,向所述肌原纤维蛋白溶液中加入核黄素和海带多酚,得含有核黄素和多酚的蛋白溶液;以所述肌原纤维蛋白溶液中肌原纤维蛋白的总量计,每克肌原纤维蛋白添加100nmol核黄素,每克肌原纤维蛋白添加150μmol海带多酚;向所述含有核黄素和多酚的蛋白溶液中加入自由基捕获剂POBN,添加量为60mM,得混合溶液A;其中,所述25mM磷酸盐缓冲液中含有0.6M NaCl;

S2、将步骤S1所述混合溶液A在4℃条件下进行UVA紫外照射,照射时间为0.5h,照射强2

度为10W/m,得混合溶液B;

S3、将步骤S2所述混合溶液B用毛细管吸取进行电子自旋共振检测;电子自旋共振检测的扫描条件为:中心磁场:3470G;扫描宽度:80G;频率:9.75GHz;衰减器:20.00dB;功率:6

10.04mW;接收增益:1.00×10 ;调制频率:100kHz;调制幅度:1.00G;相位调变:0.00deg;偏移量:0.00%;时间常数:5242.88msec;转换时间:320.00msec。