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专利号: 2019104764411
申请人: 桂林电子科技大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于RGO-CS-Fc/Au NPs纳米复合材料结合适配体作为识别探针检测甲胎蛋白的方法,按以下步骤进行:步骤1:RGO-CS-Fc材料的制备

(1)RGO的制备:将GO倒入蒸馏水中,使用超声细胞破碎仪超声,使其充分溶解均匀,制成GO水溶液;取上述GO水溶液,加入抗坏血酸,使其还原GO,得RGO;

(2)CS-Fc的制备:将CS加入乙酸溶液中,得壳聚糖溶液;将Fc与上述壳聚糖溶液混合,以EDC/NHS活化,搅拌得CS-Fc复合物;

(3)RGO-CS-Fc复合材料的制备:取RGO悬液加入到CS-Fc溶液中,EDC/NHS活化,离心分离得RGO-CS-Fc悬浊液;

步骤2:电极的修饰与生物传感界面的构建

(1)将丝网印刷电极置于H2SO4溶液中,进行循环伏安扫描,得到活化后的丝网印刷电极;

(2)将活化后的丝网印刷电极置入氯金酸溶液中,进行恒电位沉积,沉积结束后用水将电极冲洗干净,得到Au NPs/SPE电极;

(3)将Au NPs/SPE电极用戊二醛浸泡,用PBS洗涤,吹干;滴加RGO-CS-Fc悬浊液孵育,PBS洗涤,晾干,得到RGO-CS-Fc/Au NPs/SPE电极;

(4)取氨基化的AFP aptamer滴加到传感器界面,孵育一段时间,用PBS溶液洗涤未固定到界面的AFP适配体,滴加牛血清蛋白溶液进行封闭,得到AFP aptamer /RGO-CS-Fc/Au NPs/SPE传感界面,晾干备用;

步骤3:甲胎蛋白的工作曲线绘制

(1)将标准AFP溶液滴加到步骤2得到的AFP aptamer /RGO-CS-Fc/Au NPs/SPE传感界面,孵育,PBS溶液清洗,得到工作电极,晾干备用;

(2)将工作电极放入PBS溶液中,采用电化学工作站的DPV扫描,记录其峰电流;

(3)分别对不同浓度的甲胎蛋白进行检测,绘制标准曲线,计算出该方法的最低检测限;

步骤4:实际样品中AFP的检测

(1)在步骤2得到的AFP aptamer /RGO-CS-Fc/Au NPs/SPE传感界面,滴加待测实际样品,孵育,用PBS溶液清洗,得到工作电极,晾干备用;

(2)将工作电极放入PBS溶液中,采用电化学工作站的DPV扫描,记录其峰电流;

(3)根据步骤3所述标准曲线,得到所述待测实际样品中甲胎蛋白的浓度。

2.按照权利要求1所述检测甲胎蛋白的方法,其特征在于:步骤1中所述乙酸溶液质量浓度为1%、体积为100mL。

3.按照权利要求1所述检测甲胎蛋白的方法,其特征在于:步骤1中所述EDC/NHS浓度为

10 mmol/L。

4.按照权利要求1所述检测甲胎蛋白的方法,其特征在于:步骤2中所述将电极置于H2SO4中进行循环伏安扫描后,用纯水冲洗干净后,再将电极置于4mL 0.01% 氯金酸溶液进行恒电位沉积,最后用纯水冲洗晾干备用。

5.按照权利要求1所述检测甲胎蛋白的方法,其特征在于:步骤2中所述用于纳米金的沉积溶液为浓度为0.01%的氯铂酸,沉积条件为-0.5 V,沉积时间120 s。

6.按照权利要求1所述检测甲胎蛋白的方法,其特征在于:步骤2中所述BSA溶液为6μL 

0.5% 的BSA溶液。

7.按照权利要求1所述检测甲胎蛋白的方法,其特征在于:步骤3和步骤4中所述电极的孵育温度为25°C,孵育时间为30分钟。

8.按照权利要求1所述检测甲胎蛋白的方法,其特征在于:步骤3和步骤4中所述DPV扫描所用的溶液为pH值为6.0的PBS溶液。

9.按照权利要求1所述检测甲胎蛋白的方法,其特征在于:步骤3和步骤4中所述的扫描范围为-0.4V   1.2V,扫描速率为0.01V/s。

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