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专利号: 2019111248450
申请人: 广东菲鹏制药股份有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-11-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种Fc融合蛋白的纯化方法,其特征在于,其包括:将含有Fc融合蛋白的洗脱液的pH值调节至4.9-5.1。

2.根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,所述纯化方法还包括:从亲和层析柱上洗脱所述Fc融合蛋白,以得到含有所述Fc融合蛋白的所述洗脱液;

优选地,使用初始洗脱液从亲和层析柱上洗脱所述Fc融合蛋白,收集洗脱后的初始洗脱液,以得到含Fc融合的所述洗脱液,其中,所述初始洗脱液的pH值为2-3.5;

优选地,所述初始洗脱液的pH值为3.4;

优选地,所述亲和层析柱选自ProteinA或ProteinG或Protein L。

3.根据权利要求2所述的纯化方法,其特征在于,在收集洗脱后的初始洗脱液时,所用的收集容器中加入有中和缓冲液以使洗脱后的初始洗脱液与所述中和缓冲液混合后的溶液pH为6-7,即得到含有所述Fc融合蛋白的所述洗脱液;

优选地,所述中和缓冲液为Tris溶液,pH为7.5-8.5,浓度为0.8-1.2M。

4.根据权利要求3所述的纯化方法,其特征在于,所述初始洗脱液选自醋酸钠溶液、柠檬酸钠和甘氨酸溶液中的任意一种;

优选地,所述初始洗脱液为醋酸钠溶液,更优选地,所述醋酸钠溶液的浓度为18-22mM。

5.根据权利要求3所述的纯化方法,其特征在于,所述纯化方法还包括:在使用所述初始洗脱液进行洗脱前,先用PBS缓冲液清洗所述亲和层析柱;

所述PBS缓冲液的浓度含有:9-11mM PB,140-160mM NaCl,pH为7.2-7.4。

6.根据权利要求5所述的纯化方法,其特征在于,所述纯化方法还包括:将含有所述Fc融合蛋白的混合物施加于所述亲和层析柱;

优选地,所述混合物为发酵上清液;

优选地,所述发酵上清液由可表达所述Fc融合蛋白的宿主细胞发酵得到;

优选地,所述宿主细胞为哺乳动物细胞;优选地,所述哺乳动物细胞选自HEK293或CHO。

7.根据权利要求1-6任一项所述的纯化方法,其特征在于,使用柠檬酸溶液、Hcitrte溶液或甘氨酸溶液调节所述洗脱液的pH值;

优选地,所述Hcitrte溶液的浓度为0.4-0.6M。

8.根据权利要求7所述的纯化方法,其特征在于,所述纯化方法还包括:在调节所述洗脱液的pH后,将所述Hcitrte溶液与所述洗脱液的混合液静置;

优选地,静置1h以上;

优选地,所述纯化方法还包括:在静置后,对所述混合液进行离心和过滤,得到Fc融合蛋白粗品溶液;

优选地,离心的条件为:转速3000-4000rpm,时间5-15min;

优选地,过滤时采用孔径为0.2-0.24μm的过滤膜进行过滤。

9.根据权利要求1-6任一项所述的纯化方法,其特征在于,所述Fc融合蛋白包括Fc段结构域和功能蛋白结构域;

所述功能蛋白结构域选自人或小鼠的IL-10;

所述Fc段结构域为哺乳动物IgG蛋白的Fc段。

10.根据权利要求9所述的纯化方法,其特征在于,所述哺乳动物选自人和鼠中的任意一种;

优选地,所述IgG蛋白选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的任意一种。