1.一种马齿苋多糖及总黄酮联合提取方法,其包括在多糖提取操作中采用胶束介质萃取处理的步骤,其中胶束介质萃取溶液由十六烷基三甲基溴化铵溶于庚烷、体积分数为
50%的丁醇水溶液组成的混合溶剂中得到;其特征在于,所述方法包括以下步骤:步骤(1):对马齿苋进行脱脂处理;
步骤(2):对脱脂处理液进行除脂,用大孔吸附树脂柱进行梯度洗脱提取马齿苋总黄酮,分别收集含黄酮洗脱液和不含黄酮洗脱液;
步骤(3):从脱脂马齿苋提取粗多糖,过程如下:S1:将脱脂处理过的马齿苋粉末与去离子水混合,在115-121℃下高温处理1-2h,然后超声提取2-3次,过滤,合并提取液;
S2:初步浓缩:将提取液与上述树脂洗脱步骤收集的不含黄酮的洗脱液混合合并,在蒸发器中蒸发浓缩至50%体积以下,得到初步浓缩液;
S3:将初步浓缩液高速离心,收集上清液,旋蒸浓缩,4℃下将浓缩滤液用95%乙醇或无水乙醇进行醇沉,得到粗多糖沉淀,依次用无水乙醇、丙酮淋洗沉淀,干燥得到马齿苋粗多糖;
步骤(4):配制胶束介质萃取液,对酶解后的粗多糖溶液进行盐化、萃取双脱处理,过程如下:S1:配制胶束介质萃取液:
取适量十六烷基三甲基溴化铵溶于庚烷、50%丁醇混合溶剂中,充分混匀,得到胶束介质萃取液,其中十六烷基三甲基溴化铵在溶液中的质量分数为3-10%;
优选地,十六烷基三甲基溴化铵质量分数为3-5%;
S2:将马齿苋粗多糖溶于蒸馏水配制成粗多糖溶液,加入蛋白水解酶进行酶解2-4h,灭酶,冷却至室温;向酶解液加入NaCl至质量分数3-5%,混匀,进行盐化;
S3:向酶解液中加入胶束介质萃取液,剧烈震荡萃取10-15min,然后高速离心分层,得到脱蛋白、色素等杂质的多糖提取液;
步骤(5):萃取液进行透析除杂,去除小分子杂质:将上述经过双脱萃取处理的多糖溶液进行蒸发浓缩,然后在截留分子量为1-5 KD的透析袋中用蒸馏水透析除盐及小分子杂质,得到透析处理的多糖溶液;
步骤(6):蒸发浓缩析晶,降温至0-5℃继续结晶,将晶体用无水乙醇洗涤,从而得到纯化马齿苋多糖。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,还包括对所得马齿苋多糖进一步醇沉处理的步骤,过程为:将所得多糖用去离子水溶解,用5-10倍体积无水乙醇或95%乙醇醇沉16-
24h,抽滤,无水乙醇洗涤,真空干燥,即得高纯马齿苋多糖。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)具体过程如下:S1:马齿苋全草经恒温烘干,粉粹过40-60目筛,得马齿苋粉末;
S2:马齿苋粉末在索氏提取器中加入85-99%乙醇浸3-12h,50-60℃下进行索氏提取1-
5h;
其中,马齿苋与溶剂的料液质量体积比为1g:5-15ml;优选1g:5-10ml。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(2)具体过程如下:S1:脱脂处理液减压蒸馏,得到总黄酮初提物浓缩液;
S2:将浓缩液用65-75%乙醇稀释,用石油醚作为萃取剂萃取除脂;
S3:脱脂后的萃取液用大孔吸附树脂柱进行梯度洗脱,依次用去离子水、50%乙醇、
75%乙醇进行洗脱,洗脱过程中紫外检测扫描吸收峰,直至洗脱液无色且无吸收峰出现时,停止洗脱,分别收集含黄酮洗脱液和不含黄酮洗脱液;
S4:将接收的含黄酮洗脱液汇集,蒸发析出马齿苋总黄酮类化合物晶体。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)中胶束介质萃取液加入量为酶解液体积的20-25%。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)配制胶束介质萃取液的混合溶剂中50%丁醇:庚烷的体积比为1:3-5,优选1:3-4。
7.一种马齿苋高纯多糖的提取方法,其特征在于,在多糖提取操作中采用胶束介质萃取处理,其中胶束介质萃取液由十六烷基三甲基溴化铵溶于庚烷、50%丁醇组成的混合溶剂中得到,其中十六烷基三甲基溴化铵在溶液中的质量分数为3-10%;并包括如下步骤:(1)从脱脂马齿苋中提取粗多糖;
(2)配制胶束介质萃取液,对酶解后的粗多糖溶液进行盐化、萃取双脱处理;
(3)萃取液进行透析除杂,去除小分子杂质;
(4)蒸发浓缩,降温结晶,得到马齿苋多糖。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,还包括从脱脂液中进一步提取纯化马齿苋总黄酮。
9.根据权利要求1-7所述的方法制备得到的马齿苋多糖提取物。