1.一种高产L-半胱氨酸的基因工程菌，由如下方法构建而成：

(1)将底盘菌E.coli W3110基因组中的serA基因、serB基因和serC基因的启动子更换为trc启动子，得到E.coli W3110 serA serB serC(trc)；

(2)应用CRISPR-Cas9基因编辑将E.coli W3110 serA serB serC(trc)中serA基因编码的氨基酸进行H344A/N346A/N364A点突变，得到对胞内丝氨酸浓度耐受性增强的E.coli W3110 serAfbr serB serC；

(3)将E.coli serAfbrserB serC(trc)基因组中的sdaA基因、sdaB基因和tdcG基因敲fbr

除，得到E.coli W3110 serA  serB serC(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG；

(4)将E.coli W3110 serAfbr serB serC(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG的cysE基因启动子替换为trc启动子，增强cysE基因表达，得到E.coli W3110 serAfbr serB serC cysE(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG；

fbr

(5)将E.coli W3110 serA serB serC cysE(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG中cysE基因编码的氨基酸进行T167A/G245S点突变，得到对胞内半胱氨酸浓度耐受性增强的E.coli W3110 serAfbr serB serC cysEfbr(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG；

(6)将E.coli W3110 serAfbrserA serB serC cysEfbr(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG的cysB基因启动子替换为trc启动子，增强cysB基因表达，得到E.coli W3110 serAfbr serB serC cysEfbr cysB(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG；

(7)将E.coli W3110 serAfbr serB serC cysEfbr cysB(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG基因组中的Tnaa基因和Yham基因敲除，得到E.coli W3110 serAfbrserA serB serC cysEfbrcysB(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG ΔTnaa ΔYham；

(8)将来自Escherichia coli W3110的eama基因与利用XbaI和PstI限制性内切酶处理的pTrc99A进行连接，得到pTrc99A/eama，与来自E.coli W3110 serAfbrserA serB serC cysE fbrcysB(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG ΔTnaa ΔYham的点突变后的cysE基因拼接，得到Ptrc99A/eama/cysEfbr；

(9)将质粒Ptrc99A/eama/cysEfbr转入E.coli W3110 serAfbr serB serC cysE fbrcysB(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG ΔTnaa ΔYham感受态细胞中，得到重组基因工程菌W3110 serAfbrserA serB serC cysE fbrcysB(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG ΔTnaa ΔYham Ptrc99A/eama/cysEfbr；

(10)将重组基因工程菌W3110 serAfbrserA serB serC cysE fbrcysB(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG ΔTnaa ΔYham Ptrc99A/eama/cysEfbr基因组中的yciW基因敲除，得到E.coli W3110 serAfbr serB serC cysEfbr cysB(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG ΔTnaa ΔYham ΔyciW Ptrc99A/eama/cysEfbr，即所述高产L-半胱氨酸的基因工程菌。

2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于所述基因工程菌为Escherichia coli MCYS-7，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，邮编430072，保藏编号：CCTCC NO：M 2019108，保藏日期2019年2月22日。

3.构建权利要求1或2所述基因工程菌的方法，所述方法包括：

(1)应用CRISPR-Cas9基因编辑将底盘菌E.coli W3110基因组中的serA基因、serB基因和serC基因的启动子更换为trc启动子，得到E.coli W3110 serA serB serC(trc)；

(2)应用CRISPR-Cas9基因编辑将E.coli W3110 serA serB serC(trc)中serA基因编码的氨基酸进行H344A/N346A/N364A点突变，得到对胞内丝氨酸浓度耐受性增强的E.coli W3110 serAfbr serB serC；

(3)应用CRISPR-Cas9基因编辑将E.coli W3110 serAfbrserB serC(trc)基因组中的sdaA基因、sdaB基因和tdcG基因敲除，得到E.coli W3110 serAfbr serB serC(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG；

(4)应用CRISPR-Cas9基因编辑将E.coli W3110 serAfbr serB serC(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG的cysE基因启动子替换为trc启动子，增强cysE基因表达，得到E.coli W3110 serA serB serC cysE(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG；

(5)应用CRISPR-Cas9基因编辑将E.coli W3110 serAfbr serB serC(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG中cysE基因编码的氨基酸进行T167A/G245S点突变，得到对胞内半胱氨酸浓度耐受性增强的E.coli W3110 serAfbr serB serC cysEfbr(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG；

fbr fbr

(6)应用CRISPR-Cas9基因编辑将E.coli W3110 serA  serB serC cysE (trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG的cysB基因启动子替换为trc启动子，增强cysB基因表达，得到E.coli W3110 serAfbrserB serC cysEfbr cysB(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG；

(7)应用CRISPR-Cas9基因编辑将E.coli W3110 serAfbr serB serC cysEfbr cysB(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG基因组中的Tnaa基因和Yham基因敲除，得到E.coli W3110 serAfbr serB serC cysE fbrcysB(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG ΔTnaa ΔYham；

(8)将来自Escherichia coli W3110的eama基因与利用XbaI和PstI限制性内切酶处理的pTrc99A进行连接，得到pTrc99A/eama，与来自E.coli W3110 serAfbr serB serC cysE fbrcysB(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG ΔTnaa ΔYham的点突变后的cysE基因拼接，得到Ptrc99A/eama/cysEfbr；

(9)将质粒Ptrc99A/eama/cysEfbr转入E.coli W3110 serAfbr serA serB serC cysE fbrcysB(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG ΔTnaa ΔYham感受态细胞中，得到重组基因工程菌W3110 serAfbr serB serC cysE fbrcysB(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG ΔTnaa ΔYham Ptrc99A/eama/cysEfbr；

(10)将重组基因工程菌W3110 serAfbrserA serB serC cysE fbrcysB(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG ΔTnaa ΔYham Ptrc99A/eama/cysEfbr基因组中的yciW基因敲除，得到E.coli W3110 serAfbr serB serC cysEfbr cysB(trc)ΔsdaA ΔsdaB ΔtdcG ΔTnaa ΔYham ΔyciW Ptrc99A/eama/cysEfbr，即所述高产L-半胱氨酸的基因工程菌。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述trc启动子核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

5.权利要求1所述基因工程菌在微生物发酵制备L-半胱氨酸中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述应用为：将所述基因工程菌菌株接种至发酵培养基中，30～37℃、100～200rpm条件下进行发酵培养48h以上，发酵结束后取发酵液上清分离纯化得到L-半胱氨酸。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述发酵培养基组成如下：葡萄糖20g/L、(NH4)2SO4 16g/L、KH2PO4 1g/L、酵母提取物2g/L、CaCO3 10g/L、1ml/L微量元素溶液，溶剂为水，pH值自然；其中微量元素溶液组成为：0.15g/L Na2MoO4·2H2O、2.5g/L Na3BO3、0.7g/L CoCl2·6H2O、0.25g/L CuSO4·5H2O、1.6g/L MnCl2·4H2O、0.3g/L ZnSO4·7H2O，溶剂为水，pH值7.0。