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专利号: 2019103917570
申请人: 大连工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种虾夷扇贝二肽,其特征在于,由M、K2个氨基酸残基组成,分子量为277.38Da,其氨基酸序列如SEQ ID:1所示。

2.一种虾夷扇贝二肽/ι-卡拉胶复合凝胶的制备方法,其特征在于,包括步骤:S1、制备ι-卡拉胶水溶液:将ι-卡拉胶加水溶解,制备成浓度为12~15mg/mL的卡拉胶水溶液;

S2、制备复合凝胶:将虾夷扇贝二肽加入到步骤S1制得的ι-卡拉胶水溶液中,混匀,得虾夷扇贝二肽/ι-卡拉胶复合凝胶;所述虾夷扇贝二肽/ι-卡拉胶复合凝胶中虾夷扇贝二肽的浓度为0.1~0.3mol/L;所述虾夷扇贝二肽的氨基酸序列如SEQ ID:1所示;

S3、排气泡:将步骤S2制备的虾夷扇贝二肽/ι-卡拉胶复合凝胶排除气泡,制得终产物。

3.根据权利要求2所述虾夷扇贝二肽复合凝胶/ι-卡拉胶复合凝胶的制备方法,其特征在于,步骤S1所述溶解的温度为60~70℃。

4.根据权利要求2所述虾夷扇贝二肽复合凝胶/ι-卡拉胶复合凝胶的制备方法,其特征在于,步骤S3所述排气泡具体为:将步骤S2所述虾夷扇贝二肽/ι-卡拉胶复合凝胶2500~

5000rpm离心5~10min,4~7℃放置8~16h,得到终产物。

5.一种如权利要求1所述虾夷扇贝二肽的模拟筛选方法,其特征在于,包括步骤:S1、原料预处理:取雄性虾夷扇贝生殖腺,匀浆至无颗粒状,得匀浆液;

S2、SDS-PAGE分析:取步骤S1所述匀浆液进行SDS-PAGE电泳;

S3、蛋白质质谱鉴定:将步骤S2所得SDS-PAGE胶上清晰的单一蛋白条带切下,进行蛋白质质谱鉴定;

S4、蛋白质序列筛选:根据步骤S3所述蛋白质质谱鉴定结果,筛选出种属为虾夷扇贝、分子量在47.97KDa~67.97KD、6.99KDa~26.99KDa、5.46KDa~25.46KDa、4.07KDa~

24.07KDa范围之间的蛋白质序列;

S5、in silico分析:将步骤S4所述蛋白质序列,利用BIOPEP在线工具,选择胰蛋白酶Trypsin为参数进行模拟酶解,获得产物肽;

S6、目标肽的筛选:在步骤S5所述产物肽中筛选等电点pI>7.0,在pH7.0时带正电荷以及溶解性好的阳离子肽,获得目标肽序列,所述目标肽的氨基酸序列如SEQ ID:1所示;

S7、合成肽:将步骤S6所述目标肽序列使用化学法中的固相法进行肽合成,得虾夷扇贝二肽。

6.根据权利要求5所述虾夷扇贝二肽的模拟筛选方法,其特征在于,步骤S1所述匀浆具体为:2000~4000rpm、10~15min。

7.根据权利要求5所述虾夷扇贝二肽的模拟筛选方法,其特征在于,步骤S2所述SDS-PAGE分析具体为:取步骤S1所述匀浆液与上样缓冲液等体积混合,100℃加热5~10min,25℃、200~500rpm震荡10~14h,10000g离心5~10min,取上清液;取所述上清液用上样缓冲液分别稀释2倍、4倍、8倍,所得稀释后的样品10μL进行SDS-PAGE检测;

其中,所述上样缓冲液包括组分:950μL A液,50μLβ-巯基乙醇;所述A液包括组分:

1.25mL pH6、0.5M Tris-HCl,2.5mL甘油,2mL质量分数10%SDS。