利索能及
我要发布
收藏
专利号: 201910361982X
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.具有提高出芽短梗霉代谢产物的启动子,其特征在于:所述启动子为出芽短梗霉6-磷酸葡萄糖异构酶启动子Asp.PGI、出芽短梗霉1,6-二磷酸醛缩酶启动子Asp.FBA、出芽短梗霉磷酸甘油酸激酶启动子Asp.PGK、红冬孢酵母菌6-磷酸葡萄糖异构酶启动子Rt.PGI和红冬孢酵母菌1,6-二磷酸醛缩酶启动子Rt.FBA中的至少一种;所述出芽短梗霉6-磷酸葡萄糖异构酶启动子Asp.PGI的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;所述出芽短梗霉1,6-二磷酸醛缩酶启动子Asp.FBA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;所述出芽短梗霉磷酸甘油酸激酶启动子Asp.PGK的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示;所述红冬孢酵母菌6-磷酸葡萄糖异构酶启动子Rt.PGI的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示;所述红冬孢酵母菌1,6-二磷酸醛缩酶启动子Rt.FBA的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

2.权利要求1所述启动子在提高出芽短梗霉代谢产物含量中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于:所述代谢产物为聚苹果酸、普鲁兰多糖、短梗霉素、重油中的至少一种。

4.含有权利要求1所述启动子的重组表达载体。

5.根据权利要求4所述的重组表达载体,其特征在于:所述重组表达载体为pBARGPEI质粒的SmaI与EcoRI酶切位点处连入含启动子和潮霉素编码区的片段。

6.根据权利要求5所述的重组表达载体,其特征在于:所述重组表达载体由以下方法构建:以SEQ ID NO.16和SEQ ID NO.17所示序列为引物,含潮霉素基因的质粒为模板扩增获得潮霉素编码区,然后将潮霉素编码区分别与出芽短梗霉6-磷酸葡萄糖异构酶启动子Asp.PGI、出芽短梗霉1,6-二磷酸醛缩酶启动子Asp.FBA、出芽短梗霉磷酸甘油酸激酶启动子Asp.PGK、红冬孢酵母菌6-磷酸葡萄糖异构酶启动子Rt.PGI和红冬孢酵母菌1,6-二磷酸醛缩酶启动子Rt.FBA混合作为模板,分别以SEQ ID NO.19与SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20与SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.21与SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.22与SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.23与SEQ ID NO.18作为引物扩增获得含启动子和潮霉素编码区的重叠片段,然后连入pBARGPEI质粒SamI与EcoRI酶切位点处,获得重组表达载体。

7.权利要求4~6任一项所述重组表达载体在提高出芽短梗霉代谢产物含量中的应用。

8.一种提高出芽短梗霉代谢产物的方法,其特征在于:使用至少一个权利要求1的启动子启动至少一个代谢途径限速酶基因在出芽短梗霉中超量表达,即获得高产代谢产物的出芽短梗霉。

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于:所述代谢途径限速酶基因为异柠檬酸裂解酶ICL基因或/和苹果酸合成酶MLS基因,所述异柠檬酸裂解酶ICL基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.34所示;所述苹果酸合成酶MLS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.35所示。

10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于:所述异柠檬酸裂解酶ICL基因由红冬孢酵母菌1,6-二磷酸醛缩酶启动子Rt.FBA启动表达;所述MLS基因由出芽短梗霉1,6-二磷酸醛缩酶启动子Asp.FBA启动表达。