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专利号: 2019100716404
申请人: 辽宁大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-12-30
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种高速逆流色谱分离红树莓果中矢车菊素的方法,其特征在于,包括如下步骤:

1)制备提取物:由红树莓果制备粗提液,减压浓缩,冷冻干燥,得红树莓果粗提物;

2)初步纯化:利用大孔吸附树脂色谱柱对步骤1)得到的红树莓果粗提物以乙醇为洗脱液进行洗脱处理,得洗脱物;

3)分离化合物:利用高速逆流色谱对步骤2)得到的洗脱物进行分离纯化,得到化合物。

2.根据权利要求1所述的一种高速逆流色谱分离红树莓果中矢车菊素的方法,其特征在于,步骤1)制备提取物,具体包括如下步骤:

1.1)将红树莓果捣碎,按料液比1g:5mL~1g:10mL,加入质量浓度为60%~90%的乙醇或甲醇水溶液超声提取,提取温度为25~35℃,提取时间为30~60min,所得提取液过滤,得滤液;

1.2)将所得滤液,35℃下减压浓缩,冷冻干燥,得红树莓果粗提物。

3.根据权利要求2所述的一种高速逆流色谱分离红树莓果中矢车菊素的方法,其特征在于,所述的60%~90%的乙醇或甲醇水溶液的PH为2.0-3.0。

4.根据权利要求1所述的一种高速逆流色谱分离红树莓果中矢车菊素的方法,其特征在于,步骤2)初步纯化,具体包括如下步骤:

2.1)将步骤1)所得的红树莓果提取粉末溶于水中,以上样浓度15~25mg/mL加入到大孔吸附树脂色谱柱中,静止1~3h,先用3BV0.01%TFA水溶液洗脱,弃去洗脱液,然后使用4~6BV质量浓度为70~80%乙醇溶液以2mL/min的流速进行洗脱,收集70~80%乙醇洗脱液;

2.2)对70~80%乙醇洗脱液进行减压浓缩、冷冻干燥,得到纯化后的红树莓果提取物。

5.根据权利要求1所述的一种高速逆流色谱分离红树莓果中矢车菊素的方法,其特征在于,步骤3)分离化合物,具体步骤如下:将正丁醇、甲基叔丁基醚、乙腈、水、三氟乙酸、按体积比12~2:2~0.5:1~0.5:4~6:

0.003~0.001配成混合溶液,在分液漏斗中充分振摇后静止分层,取上层作为固定相,下层作为流动相;设置高速逆流色谱仪恒温器温度25℃,然后泵入固定相,待固定相充满高速逆流色谱柱后,调节主机转速为800~900r/min,泵入流动相,检测波长为280nm,流动相流速为1.5~3mL/min;分别取步骤2)所得化合物,按体积比1:1~2的固定相和流动相混合均匀,配成浓度为10-20mg/mL的样品,进样,观察色谱峰,待目标峰出现时收集馏分,减压浓缩去除有机溶剂,冷冻干燥即得矢车菊素-3-O-β-D-槐糖苷、矢车菊素-3-O-(2”-O-β-D-葡萄糖苷-6”-O-α-L-鼠李糖苷)-β-D-葡萄糖苷和矢车菊素-3-O-β-D-葡萄糖苷。

6.根据权利要求5所述的一种高速逆流色谱分离红树莓果中矢车菊素的方法,其特征在于,步骤3)中,按体积比,正丁醇:甲基叔丁基醚:乙腈:水:三氟乙酸=5:1:1:4:0.001或正丁醇:甲基叔丁基醚:乙腈:水:三氟乙酸=6:1:1:4:0.001。