1.一种检测三磷酸腺苷的荧光生物传感器,其特征在于,包括:两段适配体DNA序列、线性挂锁探针、连接探针、AP探针、T4 DNA连接酶缓冲液、核酸外切酶Ⅰ、核酸外切酶Ⅲ、PBS缓冲液、dNTP、phi29 DNA聚合酶、NMM溶液、核酸内切酶IV;
所述的适配体-1的序列如SEQ No.1所示;
所述的适配体-2的序列如SEQ No.2所示;
所述的线性挂锁探针的序列如SEQ No.3所示;
所述的连接探针的序列如SEQ No.4所示;
所述的AP探针的序列如SEQ No.5所示;
所述的线性挂锁探针5’ 修饰磷酸基团;
所述的NMM为N-methyl mesoporphyrin IX的缩写。
2.根据权利要求1所述的荧光生物传感器,其特征在于,所述的适配体-1的3’端修饰的反向 dT。
3.根据权利要求1所述的荧光生物传感器,其特征在于,所述的AP探针的3’端修饰的反向 dT,其中3’端序列第七个碱基上修饰无嘌呤无嘧啶位点。
4.根据权利要求1所述的荧光生物传感器,其特征在于,所述的T4 DNA连接酶缓冲液为
50 mM Tris-HCl、10 mM MgCl2、10 mM DTT和1 mM ATP;所述的PBS缓冲液为10 mM Na2HPO4、
10 mM NaH2PO4、140 mM NaCl、1 mM KCl、1 mM MgCl2、1 mM CaCl2、pH=7.4。
5.一种权利要求1所述的荧光生物传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)构建环形模板,制备复合探针;
(2)复合探针与内切酶、目标物结合,实现信号放大。
6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于, 所述的步骤(1),包括以下步骤:S1 将线性挂锁探针与连接探针加入到T4 DNA连接酶缓冲液,灭活体系中的T4 DNA连接酶;
S2 加入核酸外切酶Ⅰ和核酸外切酶Ⅲ,得到环形模板,4℃条件下保藏;
S3 向环形模板中加入适配体-1、PBS缓冲液,孵育,得到复合探针I;向环形模板中加入无嘌呤无嘧啶探针,孵育,得到复合探针II。
7.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述的步骤(2)的过程为:将复合探针I、dNTP、复合探针II、适配体-2、phi29 DNA聚合酶、NMM溶液、核酸内切酶IV、缓冲液混合,加入目标物ATP,恒温反应。
8.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于,所述的NMM为N-methyl mesoporphyrin IX的缩写,所示的NMM溶液为:称取NMM粉末0.0009 g,溶于90 μL 二甲基亚砜中,于-20 ℃保存;所述的缓冲液为Phi29 DNA聚合酶的缓冲液,含有50 mM Tris-HCl、10 mM MgCl2、10 mM (NH4)2SO4、4 mM DTT,pH 7.5;所述的步骤(2)中,核酸内切酶IV最低浓度为0.5 U/μL;phi29 DNA聚合酶最低浓度为1 U/μL;NMM的最低浓度为2.4 μM。
9.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于,所述的恒温反应的温度为37℃,时间大于等于90min。