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专利号: 2020112281603
申请人: 济南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

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1.一种检测Hg 的荧光生物传感器,其特征在于,原料包括挂锁探针TP、连接探针LP、S1、S2、L、触发链T、燃料链F、T4连接酶、Exo I酶、Exo III酶、Klenow片段 (3'→5' exo‑)和硫黄素T;

所述S1、S2和L的序列如SEQ ID No: 1‑3所示;所述挂锁探针TP的序列如SEQ ID No: 5所示,5'碱基磷酸化;所述连接探针LP的序列如SEQ ID No: 6所示;触发链T的序列如SEQ ID No: 7所示;所述燃料链F的序列如SEQ ID No: 8所示;

所述S1、S2和L在溶液中杂交成复合探针Q;S1、S2和L摩尔比为1:1:1;所述杂交的条件为:95℃下孵育5min,缓慢冷却至室温;

所述挂锁探针TP和连接探针LP在T4连接酶、Exo I酶、Exo III酶作用下制备环状模板CP:将等摩尔量的挂锁探针TP、连接探针LP混合,加入缓冲液变性‑复性后,加入T4 DNA连接酶,16℃下孵育过夜,灭活酶后再加入Exo I酶和Exo III酶于37℃下消化2 h,灭活酶后即得。

2.一种利用权利要求1所述生物传感器检测汞离子中的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将S1、S2和L在溶液中杂交成复合探针Q;

(2)挂锁探针TP和连接探针LP在T4连接酶、Exo I酶、Exo III酶作用下制备环状模板CP;

(3)将触发链T、复合探针Q、燃料链F、环状模板CP、Klenow片段 (3'→5' exo‑)分别与系列浓度汞离子溶液、待测液混合均匀后孵育,灭活酶后加入硫黄素T孵育后检测荧光强度;

(4)根据系列浓度汞离子溶液荧光做标准曲线,计算待测液中汞离子浓度;

步骤(1)中,所述S1、S2和L摩尔比为1:1:1;所述杂交的条件为:95℃下孵育5min,缓慢冷却至室温;

步骤(2)中,包括以下步骤:将等摩尔量的挂锁探针TP、连接探针LP混合,加入缓冲液变性‑复性后,加入T4 DNA连接酶,16℃下孵育过夜,灭活酶后再加入Exo I酶和Exo III酶于37℃下消化2 h,灭活酶后即得;

步骤(3)中,所述荧光检测的激发波长为425nm,发射波长为485nm。

3.一种含有权利要求1所述生物传感器的试剂盒。

4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,还包括系列浓度的汞离子溶液。