1.一种芽孢表面高效展示海藻糖合酶的枯草芽孢杆菌工程菌，利用整合载体pDG1730将芽孢衣壳蛋白cotA、cotC、cotE、cotG、cotH分别与海藻糖合酶基因treS进行融合获得的融合基因片段At-Ct-Et-Gt-Ht，然后转化枯草芽孢杆菌WB800n，即得。

2.如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌工程菌，其特征在于，所述融合基因片段At-Ct-Et-Gt-Ht核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌工程菌的构建方法，其特征在于，步骤如下：(1)以枯草芽孢杆菌WB800n基因组为模板，PCR扩增芽孢衣壳蛋白中CotA，CotC，CotE，CotG和CotH蛋白的基因序列；以恶臭假单胞菌Pseudomonas putida P06为模板扩增分别与上述芽孢衣壳蛋白中CotA，CotC，CotE，CotG和CotH蛋白的基因序列对应的重叠PCR扩增海藻糖合酶treS的基因序列；

所述CotA蛋白基因的扩增引物如下所示：

cotA-F aaaactggtctgatcggatccCGACCCGATATCCTGCCTTA BamHIcotA-R gctgggtcatTTTATGGGGATCAGTTATATCCATCG所述CotC蛋白基因的扩增引物如下所示：

cotC-F accaccaccaccactgaGGTGGCGGTGGCTCGGGCcotC-R ggctgggtcatGTAGTGTTTTTTATGCTTTTTATACTCTACAA所述CotE蛋白基因的扩增引物如下所示：

cotE-F caccaccaccactgaCGAGCTCGCTCTCTAAACACGcotE-R tcctgaagaaATGACCCAGCCCGACCCG所述CotG蛋白基因的扩增引物如下所示：

cotG-F accactgaGTTTAAACCGTAAAGCGGTAAATTGGATTGA PmeIcotG-R cgggctgggtcatTTTGTATTTCTTTTTGACTACCCAGC所述CotH蛋白基因的扩增引物如下所示：

cotH-F caccaccaccactgaCGAGCTCGCCTTCTTTTTTTGcotH-R cgggtcgggctgggtcatTAAAATACTTAAATGAT所述与CotA蛋白基因PCR重叠扩增的海藻糖合酶treS基因序列的扩增引物如下所示：cotA-treS-F tccccataaaATGACCCAGCCCGACCCGcotA-treS-R accTCAGTGGTGGTGGTGGTGGT所述与CotC蛋白基因PCR重叠扩增的海藻糖合酶Tres基因序列的扩增引物如下所示：cotC-treS-F aaacactacATGACCCAGCCCGACCCGcotC-treS-R tttagagagcgagctcgTCAGTGGTGGTGGTGGTGGT所述与CotE蛋白基因PCR重叠扩增的海藻糖合酶treS基因序列的扩增引物如下所示：cotE-treS-F gtttttagtgggagatcctgaagaaATGACCCAGCCCGACcotE-treS-R ctgcaggaattcgataagcttGTTTAAACTCAGTGGTGGTGGTGGTGGT HindIII、PmeI所述与CotG蛋白基因PCR重叠扩增的海藻糖合酶treS基因序列的扩增引物如下所示：cotG-treS-F atacaaaATGACCCAGCCCGACCCGcotG-treS-R aaaagaaggcgagctcgTCAGTGGTGGTGGTGGTGGT所述与CotH蛋白基因PCR重叠扩增的海藻糖合酶treS基因序列的扩增引物如下所示：cotH-treS-F cacaatacctcaaagatcatttaagtattttaATGACCCAGCCCGACcotH-treS-R ctgcaggaattcgataagcttTCAGTGGTGGTGGTGGTGGT HindIII(2)分别采用重叠PCR将步骤(1)制得的芽孢衣壳蛋白cotA、cotC、cotE、cotG、cotH与其对应的海藻糖合酶基因片段treS分别融合，制得cotA-treS(At)、cotC-treS(Ct)、cotE-treS(Et)、cotG-treS(Gt)和cotH-treS(Ht)五种融合基因片段；所述cotA-treS融合基因片段核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述cotC-treS融合基因片段核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述cotE-treS融合基因片段核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述cotG-treS融合基因片段核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述cotH-treS融合基因片段核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

(3)将整合型质粒pDG1730经限制性内切酶BamHI和HindIII双酶切后，同时与步骤(2)中制得的融合基因片段cotA-treS、cotC-treS、cotE-treS进行无缝克隆连接，并转入大肠杆菌DH5α中，制得重组质粒pDG1730-At-Ct-Et；

(4)将步骤(3)制得的重组质粒pDG1730-At-Ct-Et经限制性内切酶PmeI和HindIII双酶切后，同时与骤(2)中制得的融合基因片段cotG-treS和cotH-treS进行无缝克隆连接，并转入大肠杆菌DH5α中，制得重组质粒pDG1730-At-Ct-Et-Gt-Ht；

(5)将步骤(4)中制得的重组质粒pDG1730-At-Ct-Et-Gt-Ht通过电转化的方法转入枯草芽孢杆菌WB800n中，通过壮观霉素平板筛选后，制得芽孢表面高效展示海藻糖合酶的枯草芽孢杆菌工程菌。

4.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中，PCR扩增Cot蛋白基因序列的反应体系如下：

2×Phanta Max Master Mix 25μL，浓度10μmol/L上游引物cot-F 2.5μL，浓度10μmol/L下游引物cot-R 2.5μL，模板2.5μL，用ddH2O补足至50μL；

PCR反应程序如下：

95℃预变性3min；95℃变性15s，60℃退火15s，72℃延伸45s，30个循环；72℃延伸5min；

4℃保存。

5.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中PCR扩增对应海藻糖合酶treS基因的反应体系如下：

2×Phanta Max Master Mix 25μL，浓度10μmol/L上游引物cot-treS-F 2.5μL，浓度10μmol/L下游引物cot-treS-R 2.5μL，模板2.5μL，用ddH2O补足至50μL；

PCR反应程序如下：

95℃预变性3min；95℃变性15s，63℃退火1min 10s，72℃延伸30s，30个循环；72℃延伸

5min；4℃保存。

6.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中，重叠PCR的初次扩增体系为25μL：Cot蛋白基因片段4μL，对应的海藻糖合酶基因片段treS  4μL，2×Phanta Max MasterMix 12.5μL，ddH2O 4.5μL；

所述重叠PCR的初次扩增程序如下：

95℃预变性3min；95℃变性15s，65℃退火15s，72℃延伸1min 30s，5个循环；72℃延伸

5min；

所述重叠PCR的补充体系为25μL：

上游引物cot-F 2μL，下游引物cot-treS-R 2μL，2×Phanta Max Master Mix 12.5μL，ddH2O 8.5μL；

所述重叠PCR补充扩增程序如下：

95℃预变性3min；95℃变性15s，63℃退火15s，72℃延伸1min 30s，30个循环；72℃延伸

5min；4℃保存。

7.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(5)中，电转化的条件如下：将6μL重组质粒加入60μL枯草芽孢杆菌感受态细胞中，2500V，5ms，电击一次。

8.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌工程菌在制备海藻糖中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，步骤如下：

(i)将芽孢表面高效展示海藻糖合酶的重组枯草芽孢杆菌在TB培养基中扩大培养，35～38℃发酵45～50h，离心，取芽孢，制得在芽孢表面固定化的海藻糖合酶；

(ii)将步骤(i)中制得的在芽孢表面固定化的海藻糖合酶用磷酸盐缓冲液重悬，然后加入麦芽糖溶液，在23～27℃条件下，转化3.5～5h，纯化，制得海藻糖。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述步骤(i)中，TB培养基组份如下：

20g/L葡萄糖，30g/L大豆蛋白胨，2.5g/L MgCl2，17mM KH2PO4，72mM K2HPO4；

优选的，所述步骤(i)中，离心条件为：4℃、7500rpm的条件下离心10min；

优选的，所述步骤(ii)中，磷酸盐缓冲液pH8.0，浓度10mM；

优选的，所述步骤(ii)中，反应体系中麦芽糖的质量百分比浓度为25～40％。