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专利号: 2020116012019
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-03-02
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种重组枯草芽孢杆菌,其特征在于,具有以下(a)~(c)至少两种的改进:(a)过表达特异性胞内伴侣蛋白CsaA的编码基因csaA和/或敲除负调控GroE系列和DnaK系列胞内伴侣蛋白的阻遏蛋白HrcA的编码基因hrcA;

(b)表达了Sec分泌系统的分泌元件;

(c)用信号肽SPRpmG或SPAspB促进目的蛋白的分泌。

2.如权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌,其特征在于,所述表达Sec分泌系统的分泌元件,包括共表达跨膜识别因子secA、膜转运通道主要成分secYEG、信号肽酶sipS、信号肽酶sipT、信号肽肽酶sppA和信号肽酶tepA中的一种或多种。

3.如权利要求1或2所述的重组枯草芽孢杆菌,其特征在于,所述表达宿主为保藏编号为CCTCC NO:M 2016536的枯草芽孢杆菌WS5。

4.如权利要求1或2所述的重组枯草芽孢杆菌,其特征在于,所述表达宿主为,在枯草芽孢杆菌WS5的基础上,通过敲除蛋白酶ΔnprE,ΔaprE,ΔnprB,Δbpr,Δmpr和Δepr获得的枯草芽孢杆菌WS9;

或在枯草芽孢杆菌WS9的基础上,通过敲除蛋白酶Δvpr获得枯草芽孢杆菌WS10;

或在枯草芽孢杆菌WS10的基础上,通过敲除蛋白酶ΔWprA获得枯草芽孢杆菌WS11。

5.如权利要求1‑4任一所述的重组枯草芽孢杆菌,其特征在于,所述重组质粒为pHY‑SPYojL‑amySA‑secA、pHY‑SPYojL‑amySA‑secYEG、pHY‑SPYojL‑amySA‑sipS、pHY‑SPYojL‑amySA‑sipT、pHY‑SPYojL‑amySA‑sppA或pHY‑SPYojL‑amySA‑tepA。

6.权利要求1‑5任一所述的重组枯草芽孢杆菌在提高α‑淀粉酶表达量中的应用。

7.一种α‑淀粉酶的生产方法,其特征在于,所述方法为,采用权利要求1‑5任一所述的重组枯草芽孢杆菌作为生产菌株进行发酵。

8.如权利要求7所述的方法,其特征在于,所述方法为,将重组枯草芽孢杆菌接种至种子培养基中,得到种子液,将种子液接种至发酵培养基中发酵。

9.如权利要求6或7所述的方法,其特征在于,将重组枯草芽孢杆菌接种于种子培养基中,于35~38℃、180~220rpm下培养8‑10h,得到种子液;将种子液接种至摇瓶发酵培养基中,于30~37℃、180~220rpm下培养45~50h;或将种子液接种至上罐发酵培养基中,于pH 

6~8、30~37℃、溶氧20~40%下进行发酵培养。

10.权利要求1‑5任一所述的重组枯草芽孢杆菌在制备含有α‑淀粉酶的食品、洗涤、造纸、纺织、酒精和医药中的应用。