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专利号: 2018112459863
申请人: 成都大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种Nucyep的编码基因,其特征在于:所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.一种重组表达载体,其特征在于:所述重组表达载体由权利要求1所述的核苷酸序列通过NdeI和XhoI酶切位点插入pET-24a(+)载体重组而成。

3.一种重组工程菌,其特征在于:所述重组工程菌由权利要求2所述的重组表达载体转化入宿主菌制备而成,所述宿主菌为Escherichia coliRosetta2(DE3)。

4.一种Nucyep的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)发酵培养权利要求3所述重组工程菌,使用乳糖作为诱导剂进行诱导表达Nucyep,得到含有Nucyep的发酵菌液;

(2)离心所述发酵液,取沉淀,使用缓冲液重悬沉淀后进行超声或匀浆处理,离心得到含Nucyep的不可溶包涵体;

(3)对上述包涵体进行溶解和复性,得到有活性Nucyep的粗酶;

(4)将Nucyep的粗酶过阴离子交换柱得到纯化Nucyep。

5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(3)中的复性过程包括如下步骤,用尿素溶液重悬包涵体,得到包涵体尿素溶解液,将包涵体尿素溶解液滴入复性缓冲液,4℃静置过夜,离心取上清,即得Nucyep;所述尿素溶液中尿素的浓度为6 8 mol/L。

~

6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于:所述包涵体尿素溶解液中包涵体的质量与尿素溶液体积的比例为1g:50mL。

7.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于:将包涵体尿素溶解液滴入复性缓冲液的过程中,包涵体尿素溶解液与复性缓冲液的体积比为1:5 1:10;复性缓冲液配方为:20 ~

mmol/L Tris-Cl,20 mmol/L MgCl2,pH为7.2。

8.一种用权利要求4-7任意一项所述的制备方法所制备的Nucyep用于非治疗目的的降解核酸的应用。

9.如权利要求8所述的应用,其特征在于,所述核酸选自双链DNA,单链DNA,或RNA。