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专利号: 2018111847306
申请人: 湖南师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种改良日本白鲫的选育方法,包括如下步骤:以日本白鲫为母本,团头鲂为父本,进行杂交,得到的杂交后代通过流式细胞DNA含量测定法进行检测筛分,挑选出染色体数目为148的异源四倍体鲫鲂进行人工精养、人工催产及人工干法授精,将受精卵滴水孵化后进行饲养,得到的自交后代通过生物学方法进行检测筛分,挑选出两性可育的、染色体数目为

100的改良二倍体日本白鲫,即得到所述的改良日本白鲫。

2.根据权利要求1所述的选育方法,其特征在于,所述人工精养的具体操作包括以下步骤:将挑选出的异源四倍体鲫鲂单独养殖在池塘,饵料采用蛋白质量含量为25~35%的人工复合饲料,养殖密度为1900~2100尾/亩,雌雄比例为1:4~5;在繁殖期前3~4个月,挑选两龄及两龄以上、性成熟特征明显、体征良好的雌性异源四倍体鲫鲂作为远缘杂交的母本亲鱼,挑选能挤出水样精液的雄性异源四倍体鲫鲂作为父本亲鱼,将父本亲鱼及母本亲鱼放入亲鱼培育池进行精养,保持水质良好,在繁殖期前1~2个月以精饵饲养,每隔2~3天流水刺激一次,以促进亲鱼性腺发育成熟。

3.根据权利要求1所述的选育方法,其特征在于,所述人工催产的具体操作包括以下步骤:在当年的4月中旬至5月上旬,当水温稳定在20℃以上时,对母本亲鱼注射黄体素释放激素类似物与绒毛膜促性腺激素的混合催产剂进行催产,黄体素释放激素类似物的量为10~

12ug/kg,绒毛膜促性腺激素的量为600~700IU/kg,4~5h后再对父本亲鱼注射黄体素释放激素类似物与绒毛膜促性腺激素的混合催产剂进行催产,黄体素释放激素类似物的量为5~6ug/kg,绒毛膜促性腺激素的量为300~350IU/kg,注射完毕后按1:4~6的数量比将母、父本亲鱼放入同一水面面积为60~80m2产卵池中,然后及时向池中冲水,在产卵前3~4h,停止注水,让鱼在静水中催产,直至其开始顺利产卵和产精;注射时采用胸鳍基部无鳞处腹腔一针注射法。

4.根据权利要求1所述的选育方法,其特征在于,所述人工干法授精的具体操作包括如下步骤:人工催产10h后,挑选产卵顺利的雌性异源四倍体鲫鲂母本亲鱼,以及能产生水样精液的雄性异源四倍体鲫鲂的父本亲鱼,用湿毛巾将亲鱼包裹固定,用毛巾将打捞的亲鱼腹部擦干,然后轻压母本亲鱼腹部,将母本亲鱼卵子挤到干净无水的盆中,用同样的方法将产精量大的父本亲鱼精液挤到所述卵子上面,再用羽毛轻轻搅动1~2min,使之完成授精。

5.根据权利要求1所述的选育方法,其特征在于,所述受精卵滴水孵化的具体操作包括如下步骤:将受精卵铺于培养皿中滴水孵化,水温保持在20~22℃,用吸管定期吸取死掉的受精卵,直至鱼苗孵出。

6.根据权利要求1所述的选育方法,其特征在于,所述饲养的具体操作包括如下步骤:

鱼苗全部孵出后,在大盆中培育2~3天,然后置于网箱中培育1~2天,每天喂两次鸡蛋黄,转入预先培肥的池塘饲养,池塘每天泼洒2~3次豆浆,待鱼苗长到4~5cm,每天喂两次饲料粉。

7.根据权利要求1所述的选育方法,其特征在于,所述通过生物学方法进行检测筛分是利用肾组织染色体倍性检测法、流式细胞DNA含量测定法以及组织学切片观察法对自交后代鱼进行染色体数目、DNA含量以及性腺发育的检测,再根据检测结果进行筛分。

8.一种改良日本白鲫品系的建立方法,包括如下步骤:在所述权利要求1~7中任一项所述选育方法选育得到的改良日本白鲫中,选择改良日本白鲫雌雄个体分别进行人工诱导雌核发育及雄核发育,再将雌核发育得到的能产生正常单倍体卵子的雌鱼与雄核发育得到的能产生白色精液的雄鱼交配,得到的后代中选择一龄及一龄以上、性成熟特征明显的进行自交,所述自交通过人工催产与人工干法授精实现,至少通过两代连续自交,获得遗传性状稳定、两性可育的改良日本白鲫品系。

9.根据权利要求8所述的建立方法,其特征在于,所述人工诱导雌核发育的具体操作包括如下步骤:在繁殖季节、水温稳定在20℃以上时,选择一龄及一龄以上、性成熟特征明显的雌性改良日本白鲫和雄性团头鲂进行人工催产,将获得的团头鲂精子按1:3-4的质量比加入Hank’s液,然后置于培养皿中在功率为30瓦的紫光灯下进行照射,紫外灯距盛有精子溶液的培养皿10~12cm,培养皿放在冰上,并放置在摇床上摇动,观察精子的活力,待团头鲂精子活力明显减弱时停止照射,得到灭活的精液;将人工催产获得的改良日本白鲫的卵子挤入盆中,加入经过灭活的精液,再加入质量浓度为0.6%的生理盐水进行摇荡混合使其受精,将得到的受精卵放入4℃水中进行冷处理20min,然后置于培养皿中滴水孵化,进行饲养,得到能产生正常单倍体卵子的雌鱼。

10.根据权利要求8所述的建立方法,其特征在于,所述雄核发育的具体操作包括如下步骤:在繁殖季节、水温稳定在20℃以上时,选择一龄及一龄以上、性成熟特征明显的雄性改良日本白鲫和雌性鲤鱼进行人工催产,将获得的鲤鱼卵子挤入加了卵巢液的培养皿中,然后在功率为30瓦的紫光灯下进行照射,紫外灯距盛有卵子溶液的培养皿10~12cm,培养皿放在冰上,并放置在摇床上摇动,紫外灯照射3min后停止照射;将人工催产获得的改良二倍体日本白鲫的精子挤入经紫外照射过鲤鱼卵子的培养皿中,再加入质量浓度为0.6%的生理盐水进行摇荡混合使其受精,将得到的受精卵放入4℃水中进行冷处理20min,然后置于培养皿中滴水孵化,进行饲养,得到能产生白色精液的雄鱼。