1.一种从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法,其特征在于,包括如下步骤:S1、海参体腔液预处理:收集海参体腔液,离心取上清液,得体腔清液;
S2、透析法低温除盐:4℃条件下对步骤S1所得体腔清液进行透析除盐;
S3、提取主要卵黄蛋白:将分子量6000的聚乙二醇加入步骤S2所得透析除盐后的海参体腔清液,使聚乙二醇终浓度按重量计算为10%~16%,调整pH至7~8,4℃静置3~9h,
7500~8500g离心10~20min,收集沉淀;
S4、复溶:将步骤S3所得的主要卵黄蛋白沉淀用磷酸盐缓冲溶液复溶、过滤,得蛋白溶液;
S5、透析:将步骤S4所得蛋白溶液使用去离子水进行透析;
S6、干燥、将步骤S5中所得产物真空冷冻干燥,得主要卵黄蛋白。
2.根据权利要求1所述从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法,其特征在于,步骤S1所述海参预处理具体为:利用滤纸吸干海参表面的液体,将海参从腹部切开,收集体腔液,所述体腔液在4℃、1500~2000×g条件下离心10~15min,收集上清液,得体腔清液。
3.根据权利要求1所述从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法,其特征在于,步骤S2所述透析法低温除盐具体为:利用2~5KDa的透析膜、10~30mM pH7~8的磷酸盐缓冲溶液对步骤S1所得体腔清液进行透析处理48~72h,所述磷酸盐缓冲溶液的用量为体腔清液的
10~20倍,控制磷酸盐缓冲溶液温度在4℃。
4.根据权利要求1所述从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法,其特征在于,步骤S4所述复溶具体为:将步骤S3所得的主要卵黄蛋白沉淀用10~30mM pH7~8的磷酸盐缓冲溶液,以5~10mL/g的比例进行复溶,经过0.22~0.45μm微孔滤膜过滤,得蛋白溶液。
5.根据权利要求1所述从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法,其特征在于,步骤S5所述透析具体为:将步骤S4所得的蛋白溶液利用3~4KDa的透析膜、去离子水在4℃透析
48h,所述去离子水的用量为蛋白溶液的10~20倍。
6.根据权利要求1所述从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法,其特征在于,步骤S6所述真空冷冻干燥具体为:1~5Pa,‑25~‑50℃,干燥48~72h。
7.根据权利要求1所述从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1、海参体腔液预处理:利用滤纸吸干新鲜仿刺参表面的液体,将海参从腹部切开,收集体腔液,在4℃、1500×g条件下离心15min,收集上清液即体腔清液;
S2、透析法低温除盐:利用5KDa的透析膜、30mM pH7.4的磷酸盐缓冲溶液对步骤S1所得体腔清液进行透析除盐60h,所述磷酸盐缓冲液的用量为体腔清液的20倍,控制整个除盐过程磷酸盐缓冲溶液温度在4℃;
S3、提取主要卵黄蛋白:在4℃条件下,将分子量6000的聚乙二醇添加到步骤S2所得的海参体腔清液中,使聚乙二醇终浓度按重量计算为16%,使用0.5mol/L的NaOH溶液或
0.5mol/L的盐酸溶液调整反应体系pH为8,静置6h,7500g离心20min,收集沉淀;
S4、复溶:将步骤S3所得沉淀按5mL/g的比例用30mM pH7.4的磷酸盐缓冲溶液复溶,经过0.45μm微孔滤膜过滤,得蛋白溶液;
S5、透析:将步骤S4所得的主要卵黄蛋白溶液利用3.5KDa的透析膜、去离子水在4℃透析72h,所述去离子水的用量为蛋白溶液的20倍;
S6、干燥、将步骤S5中所得产物在1Pa,‑30℃条件下真空冷冻干燥48h,得主要卵黄蛋白。