1.一种西瓜炭疽病抗性室内鉴定的方法，其特征在于，包括以下步骤：

培养基的制备：取琼脂和固体营养颗粒采用凝胶法制备培养基，并将培养基制备成平面培养基和斜面培养基，所述固体营养颗粒为维生素、石蜡、葡萄糖、氨基酸、明胶、网状大豆蛋白纤维、蜂蜜制备的多层球形颗粒；所述培养基的制备方法为：将维生素、石蜡、葡萄糖、氨基酸混合加入无菌去离子水中，得到悬浮液，随后加入淀粉搅拌成糊状物，将糊状物涂抹至粒径为2mm球形模具上，制备成为球形颗粒，待球形颗粒表面风干后取出，置于40‑45℃的干燥箱内干燥，得到内层营养颗粒；

将内层营养颗粒置于明胶与葡萄糖的凝胶状混合物中，于30‑35℃的温度下以200‑

400r/min搅拌1h，静置消泡2h后，于‑1‑2℃凝固，自然风干得到双层营养颗粒，所述双层营养颗粒粒径为2.5mm；

将双层营养颗粒外部包裹网状大豆蛋白纤维，于20‑25℃的烘箱内干燥，得到三层营养颗粒，所述三层营养颗粒粒径为2.7mm；

将蜂蜜以1200‑1400r/min搅拌5‑10min后，加入第三层营养颗粒，以300‑400r/min搅拌

2h，取出，于20‑25℃的烘箱内烘干，得到固体营养颗粒，所述固体营养颗粒粒径为3mm；

将固体营养颗粒加入半凝固态的琼脂中，进行1‑2min的紫外线灭菌，凝胶完全冷却后得到培养基备用；

接种体的分离：剪取西瓜叶片的病键部，于浓度为75wt％的乙醇溶液中浸泡30s，取出用0.1wt％次氯酸钠溶液浸泡1min后，插入平面培养基中，于黑暗环境中暗培养2‑3d，出菌丝后转接到新的平面培养基上，得到接种体；

接种体鉴定：提取接种体的菌丝DNA进行PCR扩增，将得到的PCR扩增产物进行凝胶电泳分析，并进行DNA序列对比，得到西瓜炭疽病病原菌接种体；

接种体保存：将鉴定为西瓜炭疽病病原菌的接种体进行分离纯化，然后转接到斜面培养基于26‑28℃进行暗培养3‑4d；

接种体复壮：将保存的接种体在平面培养基上于26‑28℃进行暗培养3‑4d，将培养的菌丝接种于病感西瓜叶上，于温度为26‑28℃、相对湿度为85‑90％进行昼夜培养，待叶片发病后将接种体分离，得到分离物；

接种孢子制备：将分离物转接于平面培养基上，于26‑28℃培养箱进行暗培养7‑8d，待菌丝长满平面培养基后，洗下孢子，制备成悬浮液；

鉴定材料准备：选取西瓜幼苗的成熟叶，放入75wt％乙醇中浸泡1min，1wt％次氯酸钠溶液浸泡2min后，将1/2的成熟叶接种悬浮液，1/2的成熟叶接种无菌水；

对照品种选择：选取中抗品种、高抗品种作为各抗性等级的对照品种，以各鉴定材料与对照品种相比的相对抗性判定鉴定材料的相对抗性；

接种及接种后的管理：每片成熟叶接种后，将平面培养基置于温度26‑28℃、相对湿度

80％条件下的人工气候箱内培养；

发病指数的调查：接种7‑8d后进行病情调查，观察每片成熟叶接种处的病斑发生情况，记载各个病级叶片数；

抗性评价：以参鉴品种的病情指数分别与对照品种的病情指数进行比较。

2.根据权利要求1所述的一种西瓜炭疽病抗性室内鉴定的方法，其特征在于，所述接种体的分离步骤的具体操作为：采集发病初期的西瓜叶片，剪取0.5cm×0.5cm的病键部，置于灭菌的培养皿中，于浓度75wt％乙醇溶液中浸泡30s，取出用0.1wt％次氯酸钠溶液浸泡

1min后，用无菌水清洗2次后，用灭菌滤纸吸干水分，插入平面培养基上，于28℃培养箱暗培养2d，待长出菌丝后转接到新的平面培养基，获得接种体。

3.根据权利要求2所述的一种西瓜炭疽病抗性室内鉴定的方法，其特征在于，所述接种体保存步骤的具体操作为：将鉴定为西瓜炭疽病病原菌的接种体，进行3次单孢分离纯化,再转接到含6cm斜面培养基的冷冻离心管中，并于28℃的条件下暗培养3d，在斜面培养基上倒入1cm厚的灭菌矿物油，置于4℃保存。

4.根据权利要求3所述的一种西瓜炭疽病抗性室内鉴定的方法，其特征在于，所述接种体复壮步骤的具体操作为：将保存的接种体在平面培养基上于28℃的条件下暗培养3d，从菌丝边缘用打孔器打0.6cm大小的菌丝块接种在表面消毒的感病西瓜品种早佳8424的15日龄叶片上，放入温度为28℃、相对湿度90％的人工气候箱中昼夜各12h进行培养，等叶片发病后进行接种体分离，得到分离物。

5.根据权利要求4所述的一种西瓜炭疽病抗性室内鉴定的方法，其特征在于，所述接种孢子制备步骤的具体操作为：将接种体复壮分离后获得的分离物转接到平面培养基上，于

28℃的条件下暗培养8d，待菌丝长满平面培养基产生分生孢子后，用无菌水洗下孢子，用36

层灭菌纸过滤菌丝，制成1×10个/ml分生孢子的悬浮液供接种使用。

6.根据权利要求5所述的一种西瓜炭疽病抗性室内鉴定的方法，其特征在于，所述鉴定材料准备步骤的具体操作为：选择生长点以下第2片成熟叶，每品种或资源材料设3次重复，每次重复不少于4片成熟叶，每次重复1/2成熟叶用无菌水配置的病原菌分生孢子悬浮液

2ul接种，另外的1/2成熟叶接种2ul的无菌水；

所述成熟叶为生长一致，无病虫危害的西瓜幼苗15日龄的完全展开真叶，将成熟叶用清水冲洗干净，晾干，放入75wt％乙醇中浸泡1min，1wt％次氯酸钠溶液浸泡2min后，用无菌水冲洗3次，然后在超净工作台中晾干。

7.根据权利要求6所述的一种西瓜炭疽病抗性室内鉴定的方法，其特征在于，所述接种及接种后管理步骤的具体操作为：在每片成熟叶的中间部位用微量注射器刺破表皮后注入

2ul的分生孢子悬浮液，接种后，放入铺有无菌水湿润滤纸的平面培养基中，并将平面培养基置于温度为28℃、相对湿度为90％的人工气候箱黑暗保湿24h，以后每天光照12h。

8.根据权利要求1所述的一种西瓜炭疽病抗性室内鉴定的方法，其特征在于，所述发病指数的调查的具体操作为：接种7d后进行病情调查，观察每片成熟叶接种处的病斑发生情况，记载各病级叶片数。

9.根据权利要求1所述的一种西瓜炭疽病抗性室内鉴定的方法，其特征在于，所述抗性评价步骤的具体操作为：以参鉴品种的病情指数分别与对照品种的病情指数进行比较，以3次重复病情指数平均数与对照品种病情指数进行比较，以此作为抗性划分依据，在西瓜炭疽病抗性鉴定中，参鉴品种或资源材料应进行3次鉴定实验，实验以感病对照品种的病情指数＞30，参鉴品种或资源材料的空白对照的病情指数为0，该抗性鉴定结果有效。