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专利号: 202410922644X
申请人: 西部(重庆)科学城种质创制大科学中心
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.过表达CiKPI基因在提高柑橘炭疽病抗性的应用,其特征在于,所述CiKPI基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,包括以下应用方法:将CiKPI基因导入柑橘受体细胞,获得转基因柑橘植株。

2.根据权利要求1所述的过表达CiKPI基因在提高柑橘炭疽病抗性的应用,其特征在于,CiKPI基因过表达后,转基因柑橘植株中的胰蛋白酶抑制剂的含量增加。

3.根据权利要求1所述的过表达CiKPI基因在提高柑橘炭疽病抗性的应用,其特征在于,将CiKPI基因导入受体柑橘细胞,获得转基因柑橘植株具体包括:克隆CiKPI基因;

构建CiKPI过表达载体;

CiKPI过表达载体转化柑橘,经鉴定得到炭疽病抗性提高的转基因柑橘植株。

4.根据权利要求3所述的过表达CiKPI基因在提高柑橘炭疽病抗性的应用,其特征在于,克隆CiKPI基因的方法包括:提取柑橘总RNA,反转录为cDNA作为模板,利用引物OE‑CiKPI‑F和OE‑CiKPI‑R进行PCR扩增并回收目的基因DNA片段;

引物OE‑CiKPI‑F和OE‑CiKPI‑R的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。

5.根据权利要求3所述的过表达CiKPI基因在提高柑橘炭疽病抗性的应用,其特征在于,CiKPI过表达载体为pLGNe‑CiKPI。

6.根据权利要求5所述的过表达CiKPI基因在提高柑橘炭疽病抗性的应用,其特征在于,CiKPI过表达载体的构建方法为:目的基因DNA片段和pLGNe载体分别采用限制性内切酶KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切后连接,构建过表达载体pLGNe‑CiKPI。

7.根据权利要求3所述的过表达CiKPI基因在提高柑橘炭疽病抗性的应用,其特征在于,CiKPI过表达载体转化柑橘的方法为:CiKPI过表达载体通过电击法转化根癌农杆菌,再用根癌农杆菌介导法转化柑橘外植体,遗传转化后从外植体伤口上长出的不定芽经GUS染色鉴定、嫁接、PCR鉴定、qRT‑PCR分析CiKPI表达量后得到转基因柑橘植株。

8.根据权利要求7所述的过表达CiKPI基因在提高柑橘炭疽病抗性的应用,其特征在于,PCR鉴定转基因植株的引物为:GUS‑F和GUS‑R,核苷酸序列分别如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。

9.根据权利要求7所述的过表达CiKPI基因在提高柑橘炭疽病抗性的应用,其特征在于,qRT‑PCR分析CiKPI表达量的引物为:RT‑CiKPI‑F和RT‑CiKPI‑R,核苷酸序列分别如SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示。