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专利号: 2018109289458
申请人: 江苏科技大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-03-02
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统,其特征在于,所述系统包括Cas9突变体表达载体pHS-BCR-LW062-cas9和sgRNA产生载体pHS-BPR-LC001。

2.根据权利要求1所述的基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统,其特征在于,所述pHS-BCR-LW062-cas9载体的骨架载体为pZDonor载体。

3.根据权利要求2所述的基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统,其特征在于,所述pZDonor载体上连有家蚕密码子优化的Cas9突变体cas9D10A全长CDS序列SEQ ID NO.3,且两端加有核定位信号NLS。

4.根据权利要求2所述的基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统,其特征在于,所述pZDonor载体上,Cas9突变体cas9D10A所使用的启动子为BmNPV的启动子IE1,并整合选择标记EGFP基因序列。

5.根据权利要求4所述的基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统,其特征在于,所述pZDonor载体上,EGFP与cas9D10A共用一个IE1启动子,CDS区以T2A序列间隔。

6.根据权利要求1所述的基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统,其特征在于,pHS-BPR-LC001载体的骨架载体为pENTR-L4。

7.根据权利要求6所述的基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统,其特征在于,pENTR-L4载体上连有sgRNA元件,sgRNA元件由sgRNA启动子、LacZ、sgRNA-scaffold、终止子及靶点插入酶切位点组成,其中,sgRNA元件的序列为SEQ ID NO.5,sgRNA-scaffold的序列为SEQ ID NO.4。

8.根据权利要求7所述的基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统,其特征在于,sgRNA启动子为U6启动子,靶点插入酶切位点为Bsa I,酶切位点信息为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2。

9.权利要求1~8任一所述基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统在家蚕基因敲除中的应用。

10.权利要求1~8任一所述基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统在家蚕基因/基因组编辑中的应用。