利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2020109411048
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.家蚕中敲低Seroin1基因表达在制备家蚕纯裸蛹品种中的应用,其特征在于:所述敲低Seroin1基因表达使用敲低Seroin1基因的家蚕双元转基因系统,所述系统包括基于piggyBac 的Cas9表达载体和靶标Seroin1基因的sgRNA表达载体。

2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述sgRNA的位点序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述sgRNA表达载体由以下方法制备:将SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示核苷酸序列退火形成双链连入gRNA表达载体,然后将U6‑gRNA‑TTTTT 替换pBac[U6‑gRNA‑gLMN, 3xp3‑EGFP]载体上的PU6‑gLMN‑gRNA scaffold‑T6获得sgRNA表达载体。

4.家蚕纯裸蛹品种的制备方法,其特征在于:通过在家蚕中敲除Seroin1基因,筛选纯合突变个体,获得家蚕纯裸蛹品种。

5.根据权利要求4所述家蚕纯裸蛹品种的制备方法,其特征在于:所述敲除Seroin1基因表达的方法是通过ZFNs、TALENs和CRISPR/Cas9或其变体介导靶标seroin1基因敲除。

6.根据权利要求4所述家蚕纯裸蛹品种的制备方法,其特征在于:所述敲除Seroin1基因表达的方法是通过CRISPR/Cas9介导敲除家蚕seroin1基因。

7.根据权利要求6所述家蚕纯裸蛹品种的制备方法,其特征在于:所述CRISPR/Cas9介导敲除家蚕seroin1基因由Cas9表达载体与靶标Seroin1基因的sgRNA的双元转基因系统介导。

8.根据权利要求7所述家蚕纯裸蛹品种的制备方法,其特征在于:所述靶标Seroin1基因的sgRNA由SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示核苷酸序列退火形成双链。

9.根据权利要求4所述家蚕纯裸蛹品种的制备方法,其特征在于:制备Cas9转基因家蚕;然后构建靶标seroin1基因的sgRNA表达载体,并制备sgRNA转基因家蚕;将sgRNA转基因家蚕和Cas9转基因家蚕进行杂交、荧光筛选不可再继续产生编辑的个体进行PCR分型检测,筛选到杂合体,杂合体自交,经过对突变序列的分型检测及克隆测序鉴定出后代中的纯合突变个体,获得家蚕纯裸蛹品种。

10.根据权利要求9所述家蚕纯裸蛹品种的制备方法,其特征在于:所述sgRNA表达载体由以下方法制备:将SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示核苷酸序列退火形成双链连入gRNA表达载体,然后将U6‑gRNA‑TTTTT 替换pBac[U6‑gRNA‑gLMN, 3xp3‑EGFP]载体上的PU6‑gLMN‑gRNA scaffold‑T6获得sgRNA表达载体。