1.家蚕中敲除seroin2基因表达在制备家蚕散卵品系中的应用,其特征在于:所述敲除Seroin2基因表达使用敲除Seroin2基因的家蚕双元转基因系统,所述系统包括基于piggyBac 的Cas9表达载体和靶标Seroin2基因的sgRNA表达载体。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述sgRNA的位点序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:sgRNA表达载体由以下方法制备:将SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示核苷酸序列退火形成双链连入gRNA表达载体,然后将U6‑gRNA‑TTTTT 替换pBac[U6‑gRNA‑gLMN, 3xp3‑EGFP]载体上的PU6‑gLMN‑gRNA scaffold‑T6获得sgRNA表达载体。
4.家蚕散卵品系的制备方法,其特征在于:通过在家蚕中敲除Seroin2基因,筛选纯合突变个体,获得家蚕纯散卵品种。
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于:所述敲除Seroin2基因表达的方法是通过ZFNs、TALENs和CRISPR/Cas9或其变体介导靶标seroin2基因敲除。
6.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于:所述敲除Seroin2基因表达的方法是通过CRISPR/Cas9介导敲除家蚕seroin2基因。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于:所述CRISPR/Cas9介导敲除家蚕seroin2基因由Cas9表达载体与靶标Seroin2基因的sgRNA的双元转基因系统介导。
8.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于:所述靶标Seroin2基因的sgRNA由SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示核苷酸序列退火形成双链。
9.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于:制备Cas9转基因家蚕;然后构建靶标seroin2基因的sgRNA表达载体,并制备sgRNA转基因家蚕;将sgRNA转基因家蚕和Cas9转基因家蚕进行杂交,获得F1代,将F1代中双元转基因个体与野生型个体杂交获得其后代 F2,筛选不可再继续产生编辑的个体进行PCR分型检测,筛选到杂合体,杂合体自交获得F3代,经过对突变序列的分型检测及克隆测序鉴定出后代中的纯合突变个体,获得家蚕散卵品系。
10.根据权利要求9所述的制备方法,其特征在于:所述sgRNA表达载体由以下方法制备:将SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示核苷酸序列退火形成双链连入gRNA表达载体,然后将U6‑gRNA‑TTTTT 替换pBac[U6‑gRNA‑gLMN, 3xp3‑EGFP]载体上的PU6‑gLMN‑gRNA scaffold‑T6获得sgRNA表达载体。