1.一种拟茎点霉的原生质体制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

第一步，菌种的活化：从保存于试管中的PDA固体培养基上刮取菌丝接到含有50 mL PDA液体培养基的锥形瓶中，在28 ℃、180 rpm条件下培养两天，从液体培养基中吸取2 mL菌丝液接到新的含有50 mL PDA液体培养基的锥形瓶中，继续在28 ℃、180 rpm条件下培养

36 h；

第二步：使用尼龙膜过滤菌丝液获得菌丝，然后用0.6 M的MgSO4将菌丝清洗干净，取1 g湿菌丝体于10 mL裂解液中孵育，孵育温度≥28℃，孵育时摇床转速≥80 rpm；

第三步：孵育≥8h后取出，3000 rpm-5000rpm先离心10 min，弃去上清液，用5 mL STC缓冲液重悬后得原生质体悬浊液，将悬浊液在3000 rpm-5000 rpm再离心10 min，用移液枪吸取顶部的原生质体于新的1.5 mL离心管中，稀释至108个·mL-1制得。

2.根据权利要求1所述拟茎点霉的原生质体制备方法，其特征在于：所述第一步中PDA液体培养基由土豆200g/L和葡萄糖20 g/L组成。

3.根据权利要求1所述拟茎点霉的原生质体制备方法，其特征在于：所述第二步中孵育温度为28℃，孵育时摇床转速80 rpm。

4.根据权利要求1所述拟茎点霉的原生质体制备方法，其特征在于：所述第二步中裂解液由20 mg 的Trichoderma、20 mg的Yatalase和0.8 M 无机盐离子定容至10 mL制得，所述无机盐离子是CaCl2, NaCl或MgCl2。

5.根据权利要求1所述拟茎点霉的原生质体制备方法，其特征在于：所述第三步中孵育时间为13 h，离心条件为先在3000 rpm下离心10min，弃去上清液，用5 mL STC缓冲液重悬后得原生质体悬浊液，将悬浊液在5000rpm再离心10 min。

6.根据权利要求1所述拟茎点霉的原生质体制备方法，其特征在于：所述第三步中STC缓冲液由山梨醇1.2 mol L-1、CaCl2 10 mM·L-1和pH 7.5的Tris·HCl 10 mM·L-1组成。

7.权利要求1所述制备方法制备的拟茎点霉的基因敲除方法，其特征在于包括以下步骤：

第一步：构建剪切元件和基因敲除表达框，所述剪切元件主要包括以下核心元件：来源于真菌的U6启动子、靶标基因的gRNA和终止子，所述剪切元件还包括以下核心元件：来源于真菌的ToxA启动子、Cas9基因及Nos终止子，基因敲除表达框包括以下核心元件：靶标基因ura上游同源臂、潮霉素抗性基因HygR和靶标基因ura下游同源臂；

第二步：将质粒转化进入原生质体的过程：制备PEG溶液和软琼脂再生培养基，取制备好的原生质体80 μL于新的1.5 mL离心管中，加入20 μL PEG溶液和5 μg质粒，用移液枪轻轻混匀，冰浴；冰浴30 min后加入900 μL PEG溶液，用移液枪轻轻混匀，室温条件下静置，热激；热激20 min后加入10 mL提前融化了的含有100 μg·mL-1潮霉素的再生培养基，混匀后倒入灭菌的平板，待培养基凝固后于28 ℃条件下倒置培养；敲除菌株在添加尿嘧啶的培养基上正常生长，而无尿嘧啶的培养基，敲除菌株不能生长；

第三步：基因敲除菌株的分子鉴定过程：倒置培养2-3天后挑选转化子单菌落提取基因组DNA，左右臂向外各延伸约100 bp后分别设计上下游引物，以转化子基因组DNA为模板扩增靶点处DNA片段，琼脂糖电泳鉴定；基因成功被敲除的菌株电泳条带比未被敲除的菌株或野生型菌株电泳条带大1.4 kb，将成功敲除的电泳条带切下测序，比对测序结果最终确定基因是否被成功敲除。

8.根据权利要求7所述拟茎点霉的基因敲除方法，其特征在于：所述靶标基因为ura基因和MAPK途径的关键基因mapk1，分别编码乳清酸脱氧核苷5'-磷酸脱羧酶和丝裂原激活蛋白激酶1。

9.根据权利要求7所述拟茎点霉的基因敲除方法，其特征在于：所述第二步中PEG溶液由PEG 4000（60% ）、CaCl（2 50 mM·L-1）和Tris·HCl（50 mM·L-1，pH 7.5）组成，软琼脂再生培养基由土豆200 g·L-1、山梨醇182 g·L-1、尿苷1 g·L-1、尿嘧啶1 g·L-1和琼脂粉10 g·L-1组成。

10.根据权利要求7所述拟茎点霉的基因敲除方法，其特征在于：所述第二步中待培养基凝固后于28 ℃条件下倒置培养2-3天得到阳性克隆。