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专利号: 2023104497135
申请人: 江苏农牧科技职业学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-12-22
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种用于敲除拟南芥ROS1基因的向导RNA,其特征在于,所述向导RNA包括如SEQ ID No:1和SEQ ID No:2的一对序列。

2.一种敲除拟南芥ROS1基因的方法,其特征在于,采用如权利要求1所述的向导RNA。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述方法具体包括:S100、根据向导RNA设计引物对;

S200、以质粒pCBC‑DT1T2作为模板,采用步骤S100所述的引物对进行PCR扩增、纯化、酶切后,与载体连接后获得重组质粒;

S300、采用重组质粒转化感受态细胞后筛选、验证,获得用于敲除拟南芥ROS1基因的表达载体;

S400、将步骤S300中获得的表达载体转化农杆菌并浸花后,筛选得到突变体。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,步骤S100中,所述引物对包括与SEQ ID No:1所示的序列相对应的第一引物对,以及与SEQ ID No:2所述的序列相对应的第二引物对;

所述第一引物对的序列如SEQ ID No:3和SEQ ID No:4所示;

所述第二引物对的序列如SEQ ID No:5和SEQ ID No:6所示。

5.根据权利要求3或4所述的方法,其特征在于,步骤S200中采用的载体为pHEC401。

6.根据权利要求3或4所述的方法,其特征在于,步骤S300中,验证过程包括对筛选后的菌落进行鉴定和测序;且,鉴定采用如SEQ ID No:7和SEQ ID No:8所示的序列对;

测序采用如SEQ ID No:7和SEQ ID No:9所示的序列对。

7.一种根据权利要求1所述的向导RNA或根据权利要求2‑6中任意一项所述的方法在敲除拟南芥ROS1基因中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,敲除后的拟南芥ROS1基因缺失片段的长度不小于100bp。

9.根据权利要求7或8所述的应用,其特征在于,所述拟南芥的品种为Col和Ler。