1. 一种牛溶血性曼氏杆菌抗体检测的间接ELISA试剂盒，其特征在于，包括用牛溶血性曼氏杆菌特异性蛋白chr1502包被的固相载体和HRP标记的IgG酶标二抗；所述牛溶血性曼氏杆菌特异性chr1502基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述牛溶血性曼氏杆菌抗体检测的间接ELISA试剂盒，其特征在于，所述牛溶血性曼氏杆菌特异性蛋白chr1502包被的固相载体中chr1502基因采用如下方法筛选：分别以牛溶血性曼氏杆菌感染小鼠8d、12d、16d、21d、48d和120d的血清作为一抗，以牛溶血性曼氏杆菌菌体总蛋白作为待检抗原，进行Western blot，筛选在各时间段内均具有特异免疫反应的蛋白条带，即得到初筛蛋白条带，再将所述初筛蛋白条带进行质谱检测获得多个蛋白信息，根据各蛋白在细胞中分布、抗原表位和分泌特性分析，得到初筛抗原蛋白，再将初筛抗原蛋白在大肠杆菌中表达，以牛溶血性曼氏杆菌感染血清进行Western blot检测，筛选具有强反应原性的蛋白条带对应的蛋白，得到候选抗原蛋白，将所述候选抗原蛋白进行ELISA和特异性验证，即筛选获得最终的抗原蛋白chr1502。

3.根据权利要求1所述牛溶血性曼氏杆菌抗体检测的间接ELISA试剂盒，其特征在于，所述牛溶血性曼氏杆菌特异性蛋白chr1502包被的固相载体采用如下方法制得：向固相载体中加入浓度为6μg/mL的牛溶血性曼氏杆菌特异性蛋白chr1502溶液，于4℃包被过夜后，弃去所述牛溶血性曼氏杆菌特异性蛋白chr1502溶液，向固相载体中加入质量浓度为2 %的脱脂奶粉溶液，于37℃下封闭0.5h，即得到牛溶血性曼氏杆菌特异性蛋白chr1502包被的固相载体。

4.根据权利要求1所述牛溶血性曼氏杆菌抗体检测的间接ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准阳性对照血清、标准阴性对照血清、样品稀释液、浓缩洗涤液、显色液和终止液；所述样品稀释液为含0.5 wt.% BSA、0.05 wt.% 吐温20、5 mmol/L EDTA和

0.35 mol/L NaCl的PBS缓冲液，所述样品稀释液的pH为7.2；所述浓缩洗涤液为25×PBST洗涤液；所述显色液为TMB，所述终止液为2mol/L的硫酸溶液；所述固相载体为96孔聚苯乙烯酶标板。

5.一种应用权利要求1 4任一项所述牛溶血性曼氏杆菌抗体检测的间接ELISA试剂盒~

进行检测牛溶血性曼氏杆菌抗体的方法，其特征在于，包括将待检测血清样品与固相载体上包被的牛溶血性曼氏杆菌特异性蛋白chr1502接触和保温孵育，用HRP标记的兔抗牛IgG酶标二抗特异地捕捉结合于chr1502蛋白抗原上的特异抗体，并用显色剂显色，从而测定得到待检测血清样品中针对chr1502蛋白的抗体水平；具体包括如下步骤：

1）将待检测血清样品、标准阳性对照血清和标准阴性对照血清分别用样品稀释液按照

1:200的体积比进行稀释，获得待检测血清样品稀释液、阳性对照血清稀释液和阴性对照血清稀释液；

2）分别设置空白组、阳性标准组、阴性标准组和待检测血清样品组，向用牛溶血性曼氏杆菌特异性蛋白chr1502包被的固相载体中加入100μL样品稀释液即得到所述空白组，向用牛溶血性曼氏杆菌特异性蛋白chr1502包被的固相载体中加入100μL所述阳性对照血清稀释液即得到阳性标准组，向用牛溶血性曼氏杆菌特异性蛋白chr1502包被的固相载体中加入100μL所述阴性对照血清稀释液即得到阴性标准组，向用牛溶血性曼氏杆菌特异性蛋白chr1502包被的固相载体中加入100μL所述待检测血清样品稀释液即得到待检测血清样品组，将加样后的空白组、阳性标准组、阴性标准组和待检测血清样品组于37℃孵育反应30分钟；

3）步骤2）孵育结束后，弃去空白组、阳性标准组、阴性标准组和待检测血清样品组固相载体中的液体，将浓缩洗涤液稀释至1×后分别洗涤各组固相载体3次，每次5分钟；

4）将HRP标记的IgG酶标二抗与样品稀释液按照1:20000的体积比进行稀释，获得酶标二抗稀释液，分别向步骤3）洗涤后的空白组、阳性标准组、阴性标准组和待检测血清样品组固相载体中加入所述酶标二抗稀释液100μL，于37℃孵育60分钟；

5）步骤4）孵育后，弃去各组固相载体中的液体，用稀释后的洗涤液分别洗涤各组固相载体3次，每次5分钟；

6）分别向步骤5）洗涤后的各组固相载体中加入100μL显色液，于37℃下避光显色反应

15分钟；

7）步骤6）显色反应结束后，分别向各组固相载体中加入终止液50μL终止反应，并测定空白组、阳性标准组、阴性标准组和待检测血清样品组中液体在D450nm处的吸光度值，当阳性标准组D450nm值大于1.0，阴性标准组D450nm值小于0.18时，待检测血清样品组数据有效，待检测血清样品组D450nm值大于0.192时判断为阳性，即待检测血清样品中含有牛溶血性曼氏杆菌抗体，待检测血清样品组D450nm值小于或等于0.192时判断为阴性，即待检测血清样品中不含有牛溶血性曼氏杆菌抗体。

6.如权利要求1 4任一项所述的试剂盒在检测牛溶血性曼氏杆菌抗体中的应用。

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