1.一种牛源多杀性巴氏杆菌抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括用牛源多杀性巴氏杆菌特异性蛋白0230包被的固相载体、HRP标记的IgG酶标二抗、标准阳性对照血清、标准阴性对照血清、样品稀释液、浓缩洗涤液、显色液和终止液；其中，所述牛源多杀性巴氏杆菌特异蛋白0230的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述标准阳性对照血清为犊牛感染牛源多杀性巴氏杆菌后的血清，标准阴性对照血清为未免疫和未感染多杀性巴氏杆菌的犊牛血清。

2.根据权利要求1牛源多杀性巴氏杆菌抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述牛源多杀性巴氏杆菌特异性蛋白0230采用如下方法获得：以牛源多杀性巴氏杆菌荚膜血清A型CQ2菌株的DNA作为模板，利用设计合成的特异性引物进行PCR扩增，回收PCR扩增后的目的基因片段，将所述目的基因片段与原核表达载体pET30a连接，构建重组表达质粒pET30a-Pm0230，将重组表达质粒pET30a-Pm0230转化入大肠杆菌 E.coli BL21（DE3）感受态细胞，并采用异丙基硫代半乳糖苷诱导表达，将获得的表达产物经过His标签纯化柱纯化和透析除盐处理，获得所述牛源多杀性巴氏杆菌特异性蛋白0230；所述特异性引物的上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

3.根据权利要求1所述牛源多杀性巴氏杆菌抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述样品稀释液为含0.5 wt.% BSA、0.05 wt.% 吐温20、5 mmol/L EDTA和0.35 mol/L NaCl的PBS缓冲液，所述样品稀释液的pH为7.2。

4.根据权利要求1所述牛源多杀性巴氏杆菌抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述浓缩洗涤液为25×PBST 洗涤液。

5.根据权利要求1所述牛源多杀性巴氏杆菌抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述显色液为TMB，反应终止液为2 mol/L的硫酸溶液。

6.根据权利要求1所述牛源多杀性巴氏杆菌抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述用牛源多杀性巴氏杆菌特异性蛋白0230包被的固相载体采用如下方法制得：向固相载体中加入浓度为10 μg/mL的牛源多杀性巴氏杆菌特异性蛋白0230溶液，于4 ℃包被过夜后，弃去所述牛源多杀性巴氏杆菌特异性蛋白0230溶液，向固相载体中加入质量浓度为1 %的卵清蛋白溶液，于37 ℃下封闭1.5 h。

7.根据权利要求1所述牛源多杀性巴氏杆菌抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述固相载体为96孔聚苯乙烯酶标板。

8.根据权利要求1所述牛源多杀性巴氏杆菌抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述HRP标记的IgG酶标二抗为HRP标记的兔抗牛IgG酶标二抗。

9.一种牛源多杀性巴氏杆菌抗体的间接ELISA检测方法，其特征在于，采用权利要求1~

8任一所述牛源多杀性巴氏杆菌抗体的间接ELISA检测试剂盒进行检测，将待检测血清样品与固相载体上包被的牛源多杀性巴氏杆菌特异性蛋白0230接触和保温孵育，用HRP标记的IgG酶标二抗特异地捕捉结合于0230蛋白抗原上的特异抗体，并用显色剂显色，从而测定得到待检测血清样品中针对0230蛋白的抗体水平。

10.根据权利要求9所述牛源多杀性巴氏杆菌抗体的间接ELISA检测方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

1）将待检测血清样品、标准阳性对照血清和标准阴性对照血清分别与样品稀释液按照

1:100的体积比进行稀释，获得待检测血清样品稀释液、阳性对照血清稀释液和阴性对照血清稀释液；

2）分别设置空白组、阳性标准组、阴性标准组和待检测血清样品组，所述空白组向用牛源多杀性巴氏杆菌特异性蛋白0230包被的固相载体中加入100 μL样品稀释液，阳性标准组向用牛源多杀性巴氏杆菌特异性蛋白0230包被的固相载体中加入100 μL所述阳性对照血清稀释液，阴性标准组向用牛源多杀性巴氏杆菌特异性蛋白0230包被的固相载体中加入

100 μL所述阴性对照血清稀释液，待检测血清样品组向用牛源多杀性巴氏杆菌特异性蛋白

0230包被的固相载体中加入100 μL所述待检测血清样品稀释液，将加样后的空白组、阳性标准组、阴性标准组和待检测血清样品组于37 ℃孵育反应90分钟；

3）步骤2）孵育结束后，弃去空白组、阳性标准组、阴性标准组和待检测血清样品组固相载体中的液体，用浓缩洗涤液分别洗涤各组固相载体若干次；

4）将HRP标记的IgG酶标二抗与样品稀释液按照1:500的体积比进行稀释，获得酶标二抗稀释液，分别向步骤3）洗涤后的空白组、阳性标准组、阴性标准组和待检测血清样品组固相载体中加入所述酶标二抗稀释液100 μL，于37℃孵育30分钟；

5）步骤4）孵育后，弃去各组固相载体中的液体，用浓缩洗涤液分别洗涤各组固相载体若干次；

6）分别向步骤5）洗涤后的各组固相载体中加入100 μL显色液，于37 ℃下避光显色反应10~15分钟；

7）步骤6）显色反应结束后，分别向各组固相载体中加入终止液100 μL终止反应，并测定空白组、阳性标准组、阴性标准组和待检测血清样品组中液体在 D 450nm 处的吸光度值，当阳性标准组 D 450nm 值大于1.0，阴性标准组 D 450nm 值小于0.30时，待检测血清样品组数据有效，待检测血清样品组 D 450nm 值大于0.388时判断为阳性，即待检测血清样品中含有牛源多杀性巴氏杆菌抗体，待检测血清样品组 D 450nm 值小于或等于0.388时判断为阴性，即待检测血清样品中不含有牛源多杀性巴氏杆菌抗体。