1.一种基于家蚕组织样品进行大规模蛋白质组学鉴定的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）家蚕蛋白质组学样品前处理：取家蚕脂肪体，加入100 mM DTT /8 M尿素溶液，样品放在冰上，利用G50组织研磨器对样品进行研磨，使样品充分溶解，离心收集上清液；上清液用FASP酶解方法对样品进行酶解，利用高pH分级方法将肽段分成8级，利用真空冷冻干燥仪将各组分冻干；

所述利用高pH分级方法将肽段分成8级具体为：

1）从旋转柱底部取下白色塑料套，将旋转柱放在离心管中；

2）5000 g离心2min，除去旋转柱中溶液；

3）取下旋转柱顶端红色帽子，将300 μL乙腈加载到旋转柱中，盖上红色帽子后，再把旋转柱放到离心管中，置于离心机中5000 g离心2min，清洗柱子并除去乙腈；

4）再用300 μL体积分数为0.1%的三氟乙酸洗旋转柱两次；

5）冻干的肽段样品中加入300 μL体积分数为0.1%的三氟乙酸溶液，涡旋30 s以溶解肽段；

6）将旋转柱置于新的离心管中，将样品加载到柱中，盖上红色盖子后，置于离心机3000 g离心2 min，离心管中即为流穿；

7）将旋转柱放到新的离心管中，加超纯水，3000 g离心2min后即为洗涤液；

8）配置管号1 管号8的洗脱溶液，将旋转柱放到新离心管中，加入管号1的洗脱液，盖上~红色盖子后，3000 g离心2min；

所述管号1 管号8的洗脱溶液具体如下：

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管号1：乙腈50μL，0.1% 三氟乙酸950μL；管号2：75μL，0.1% 三氟乙酸925μL；管号3：乙腈100μL，0.1% 三氟乙酸900μL；管号4：乙腈125μL，0.1% 三氟乙酸875μL；管号5：乙腈150μL，0.1% 三氟乙酸850μL；管号6：乙腈175μL，0.1% 三氟乙酸825μL；管号7：乙腈200μL，0.1% 三氟乙酸800μL；管号8：乙腈500μL，0.1% 三氟乙酸500μL；

9）收集洗脱液于离心管中，打开红色帽子，向旋转柱中加入管号为2中的溶液300 μL；

10）按照8）、9）步骤，依次加入管号3 管号8的洗脱溶液，收集不同梯度洗脱液于8个离~心管中；

（2）分级肽段质谱上机检测：将每级肽段分别加入50 μL体积分数为 0.1%的甲酸水溶解，上样量为8 μL，有效色谱梯度时间为120 min；

（3）家蚕蛋白质组学数据库：利用90%阈值对NCBI、SilkDB、Silkworm和Uniprot 4个家蚕蛋白质数据库的冗余序列进行去除，得到数据库Streamline，原始数据采用MaxQuant进行搜库。

2.根据权利要求1所述一种基于家蚕组织样品进行大规模蛋白质组学鉴定的方法，其特征在于：步骤1）中，100 mM DTT /8 M尿素溶液加入量按每毫克家蚕脂肪体加入200μL100 mM DTT /8 M尿素溶液；研磨时间为3 min；所述充分溶解为水平震荡器振荡5 min；所述离心为12000 g，25℃离心15 min。

3.根据权利要求1所述一种基于家蚕组织样品进行大规模蛋白质组学鉴定的方法，其特征在于，所述FASP酶解方法对样品进行酶解具体为： 1）将样品加入10 kDa超滤管中，加入8 M尿素溶液，混匀后置于离心机12000 g，离心

20 min；

2）再加入8 M尿素，12000 g，离心20 min；

3）重复步骤2）两次；

4）加入1 M DTT/8 M尿素溶液，管口用封口膜密封，置于37℃孵育2 h；

5）撕开封口膜，加入1 M 碘乙酰胺溶液，混匀后，避光孵育1 h；

6）12000 g离心20 min；

7）加入8 M尿素溶液，混匀后12000 g离心20 min；

8）重复步骤7）两次；

9）加入50 mM NH4HCO3溶液，12000 g离心20 min；

10）重复步骤9）三次；

11）将超滤管的外管更换成新外管，防止污染；

12）在超滤管中加入400μL 10 μg/mL胰蛋白酶溶液，管口用封口膜密封，置于37℃恒温培养箱中孵育36 h，将蛋白酶解成肽段；

13）撕掉封口膜，12000 g离心20 min；

14）在超滤管中加入40 μL 50mM NH4HCO3溶液，12000 g离心20 min；

15）4℃冷冻浓缩至样品完全干燥。

4.根据权利要求1所述一种基于家蚕组织样品进行大规模蛋白质组学鉴定的方法，其特征在于，分级肽段质谱上机检测具体为：每个组分肽段分别加入体积分数为0.1%的甲酸水后振荡30 s溶解， 12000 g离心10 min；吸上清于上样瓶中，采用Thermo Fisher Scientific EASY-nLC 1000纳升级流速系统进行肽段的分离，平衡预柱的体积为10 μL，流速为3.5 μL/min，平衡分析柱的体积为5 μL，流速为0.25 μL/min；上样量为8 μL，吸样流速为8 μL/min，使用3.5 μL/min的流速将18 μL体积分数为0.1%的甲酸水推入预柱和分析柱中，用梯度体积分数为0.1%的甲酸乙腈溶液进行肽段分离，流速为250 nL/min；有效色谱梯度时间为120 min梯度，用100 μL体积分数为

0.1%的甲酸乙腈清洗自动上样环；

采用Q Exactive质谱仪进行检测，检测时间为0-140 min，喷雾电压为2.3 kV，离子传输管温度为275℃，离子模式为正离子模式，默认电荷为两个，全扫的分辨率为70000，AGC target为1e6，Maximum IT为 20 ms，扫描范围为300到1800 m/z，二级扫描分辨率为17500，AGC target为1e5，Maximum IT为 60 ms，采用Top 10原则采集数据，动态排除时间设置为

30 s；

质谱环境温度为22℃，除湿机控制质谱工作环境空气湿度为50%。