利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2016102719155
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.适于家蚕丝腺表达的改造人血清白蛋白基因,其特征在于:所述改造人血清白蛋白基因如SEQ ID NO.1第7-1767位所示。

2.根据权利要求1所述适于家蚕丝腺表达的改造人血清白蛋白基因,其特征在于:所述改造人血清白蛋白基因编码的氨基酸如SEQ ID NO.2所示。

3.含有权利要求1或2所述适于家蚕丝腺表达的改造人血清白蛋白基因的表达系统。

4.根据权利要求3所述的表达系统,其特征在于:所述表达系统含有顺序连接的增强子hr3,分泌型丝胶1基因启动子、改造人血清白蛋白基因和丝胶1基因的终止子。

5.根据权利要求1所述的表达系统,其特征在于:所述表达系统还含有荧光筛选标记基因表达框和piggyBac转座臂序列,所述荧光筛选标记基因表达框位于所述增强子hr3上游,所述piggyBac转座臂序列位于荧光筛选标记基因表达框与piggyBac转座臂序列之间。

6.根据权利要求1所述的表达系统,其特征在于:所述表达系统的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

7.权利要求3-6任一项所述表达系统在家蚕丝腺表达重组人血清白蛋白中的应用。

8.利用权利要求3-6任一项所述表达系统在家蚕丝腺中表达重组人血清白蛋白的方法,其特征在于,包括如下步骤:将所述表达系统转化解除滞育家蚕蚕卵,用无毒胶水封口后经甲醛蒸汽消毒,孵化,筛选转基因阳性蛾圈,取阳性转基因家蚕茧壳,在液氮中粉碎成粉末,然后溶解于含20mM Tris-Cl、8M Urea、pH 7.9的缓冲液中,离心收集上清,经纯化,得重组人血清白蛋白。

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于:茧壳粉末溶解于缓冲液中茧壳粉末的浓度为20mg/mL。

10.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述纯化的具体方法为:将上清液过Capto MMC亲和层析柱,用含25mM磷酸盐缓冲液、100mM NaCl、pH6.5的漂洗液洗脱除杂,再用含25mM磷酸盐缓冲液、100mM NaCl、pH7.0-7.5的洗脱液洗脱,收集洗脱液,将洗脱液浓缩,超滤除盐;然后再过HiTrap Q柱纯化,用含25mM磷酸盐缓冲液、150mM NaCl、pH8.0的漂洗液洗脱除杂,接着用含25mM磷酸盐缓冲液、200mM NaCl、pH8.0的洗脱液洗脱,收集洗脱液并将洗脱液浓缩,加入固体硫酸铵至终浓度为2M,然后过HiTrap Phenyl FF柱,经过含25mM磷酸盐缓冲液、1M(NH4)2SO4、pH8.0的漂洗液除杂后,再用含25mM磷酸盐缓冲液、1.6M(NH4)

2SO4、pH8.0的洗脱液,洗脱液即为纯化后的重组人血清白蛋白。