1.一种检测多核苷酸激酶的试剂盒,其特征在于,包括以下成分:探针A,探针S,混合液A,模板DNA,λ核酸外切酶,多核苷酸激酶标准品,1×NEBuffer和10mM三磷酸腺苷。
2.根据权利要求1所述检测多核苷酸激酶的试剂盒,其特征在于,混合液A包括:0.05~
0.15毫克每毫升的牛血清白蛋白、0.1~0.3单位每微升的Nt.BbvCI切刻酶,0.05~0.15单位每微升的KF聚合酶、200~300微摩尔每升的三磷酸脱氧核苷酸以及10×的SYBR green I染料。
3.根据权利要求2所述检测多核苷酸激酶的试剂盒,其特征在于,混合液A包括:0.1毫克每毫升的牛血清白蛋白、0.2单位每微升的Nt.BbvCI切刻酶、0.1单位每微升的KF聚合酶、
250微摩尔每升的三磷酸脱氧核苷酸以及10×的SYBR green I染料。
4.根据权利要求1所述检测多核苷酸激酶的试剂盒,其特征在于,所述探针A的核苷酸序列为5’-GCA CAA AGG ACT GAG GCT GAG GGT TGC GCA TCT GCT ATG AAA CAA GCC AGA TGC TCA AC-3’,如SEQ ID NO.1所示,其5’末端作磷酸化修饰;探针S的核苷酸序列为5’-GTT GAG CAT CTG GCT TGT TTC ATA GCA GAT GTT TTT T-3’,如SEQ ID NO.2所示,其5’末端为羟基末端。
5.根据权利要求1所述检测多核苷酸激酶的试剂盒,其特征在于,所述模板DNA核苷酸序列为5’-GCA CAA AGG ACT GAG GCT GAG GGC ACA AAG GAC TGA G-3’,如SEQ ID NO.3所示,其3’末端为磷酸基末端。
6.根据权利要求1所述检测多核苷酸激酶的试剂盒,其特征在于,所述1×NEBuffer包括以下成分及其浓度:10毫摩尔每升的三羟甲基氨基甲烷-盐酸Tris-HCl、50毫摩尔每升的氯化钠、50毫摩尔每升的氯化镁以及1毫摩尔每升的二硫苏糖醇;pH值为7.9。
7.根据权利要求1-6任一所述检测多核苷酸激酶的试剂盒的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将探针A、探针S和1×的NEBuffer 2混合后在95℃下孵育5分钟,而后缓慢冷却30分钟以上至室温,得反应体系I;
(2)向上述反应体系I中加入三磷酸腺苷、λ核酸外切酶以及待测PNK样品于37℃孵育15~30分钟后,在70~80℃水浴中加热5~15分钟,缓慢冷却至室温,得反应体系II;
(3)将上述反应体系II置于冰上,加入模板DNA、10×NEBuffer 2混合均匀后加入混合液A,混合均匀后立即将混合液置于实时荧光定量系统中进行荧光监测。
8.根据权利要求7所述检测多核苷酸激酶的试剂盒的检测方法,其特征在于,反应体系I中探针A、探针S浓度均为100纳摩尔每升。
9.根据权利要求7所述检测多核苷酸激酶的试剂盒的检测方法,其特征在于,所述反应体系II中所用λ核酸外切酶浓度为5000单位每毫升,三磷酸腺苷浓度为10毫摩尔每升。
10.根据权利要求1-6任一所述检测多核苷酸激酶的试剂盒在PNK活性抑制性检测中的应用。