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专利号: 2019109226631
申请人: 菲鹏生物股份有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-11-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种核糖核酸酶非疾病诊断与治疗目的的检测方法,其特征在于,在待测核糖核酸酶和RNA酶抑制剂存在的条件下,在逆转录扩增体系中对RNA模板保守序列进行逆转录扩增,根据待测核糖核酸酶逆转录扩增Ct值确定待测核糖核酸酶的浓度;

所述检测方法还包括制备标准曲线的步骤,将待测核糖核酸酶逆转录扩增Ct值与标准曲线比对,得到待测核糖核酸酶的浓度;

所述标准曲线包括核糖核酸酶标准品浓度与核糖核酸酶标准品逆转录扩增Ct值的对应关系,其中,核糖核酸酶标准品逆转录扩增Ct值由逆转录扩增体系对RNA模板进行逆转录扩增检测得到。

2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述逆转录扩增体系中包括检测保守序列的检测引物和检测探针。

3.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于,所述保守序列包括内参基因。

4.根据权利要求3所述的检测方法,其特征在于,所述内参基因包括GAPDH、β‑Actin、β‑tubulin、18sRNA、28sRNA、SDHA或HPRT1。

5.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于,所述保守序列为GAPDH。

6.根据权利要求5所述的检测方法,其特征在于,GAPDH的检测引物和检测探针包括:上游检测引物:5’‑TGGAGAAACCTGCCAAGTATGATA‑3’(SEQ ID NO.1);

下游检测引物:5’‑CAGTGGGAGTTGCTGTTGAAGTC‑3’(SEQ ID NO.2);

检测探针:5’‑ATCAAGAAGGTGGTGAAGCAGGCAT‑3’(SEQ ID NO.3)。

7.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述逆转录扩增体系中包括逆转录酶、DNA聚合酶、dNTPs和缓冲液。

8.根据权利要求7所述的检测方法,其特征在于,所述逆转录扩增体系中还包括镁离子、铵离子、钾离子和表面活性剂中的至少一种。

9.根据权利要求1‑8任一项所述的检测方法,其特征在于,所述核糖核酸酶包括RNase A、RNase B或RNase C。

10.一种核糖核酸酶检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括RNA酶抑制剂、检测保守序列的检测引物、检测探针、逆转录扩增体系和核糖核酸酶标准品。

11.根据权利要求10所述的试剂盒,其特征在于,所述逆转录扩增体系还包括逆转录酶和DNA聚合酶。

12.根据权利要求10所述的试剂盒,其特征在于,所述逆转录扩增体系还包括dNTPs和缓冲液。

13.根据权利要求10所述的试剂盒,其特征在于,所述逆转录扩增体系还包括镁离子、铵离子、钾离子和表面活性剂中的至少一种。

14.根据权利要求10所述的试剂盒,其特征在于,检测引物和检测探针包括:上游检测引物:5’‑TGGAGAAACCTGCCAAGTATGATA‑3’(SEQ ID NO.1);

下游检测引物:5’‑CAGTGGGAGTTGCTGTTGAAGTC‑3’(SEQ ID NO.2);

检测探针:5’‑ATCAAGAAGGTGGTGAAGCAGGCAT‑3’(SEQ ID NO.3)。

15.权利要求1‑9任一项所述的检测方法或权利要求10~14任一项所述的试剂盒在如下a)或b)中的应用:a)非疾病诊断与治疗目的检测待测核糖核酸酶含量或相对含量;

b)非疾病诊断与治疗目的比较两个或多个待测核糖核酸酶样本的含量或相对含量。