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专利号: 2017110276929
申请人: 山东师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2024-07-30
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种同时检测hOGG1和hAAG的荧光化学传感器,其特征在于,所述荧光化学传感器包括:hOGG1分子信标和hAAG分子信标;

其中,所述hOGG1分子信标为一个具茎环结构的发夹DNA探针,两条茎结构互补形成双链DNA,所述双链DNA具有hOGG1的识别位点;所述分子信标的茎结构两个末端分别用荧光基团I和淬灭基团I标记;所述hOGG1的识别位点为8-羟基鸟嘌呤/胞嘧啶碱基对;

所述hAAG分子信标为一个具茎环结构的发夹DNA探针,两条茎结构互补形成双链DNA,所述双链DNA具有hAAG的识别位点;所述分子信标的茎结构两个末端分别用荧光基团II和淬灭基团II标记;所述hAAG的识别位点为脱氧次黄嘌呤/胸腺嘧啶碱基对。

2.如权利要求1所述的一种荧光化学传感器,其特征在于,所述荧光基团I与荧光基团II为两个发射光谱之间没有明显光谱重叠和串扰的荧光基团,优选的,所述荧光基团I为Cy3,所述淬灭基团I为BHQ2淬灭剂;所述荧光基团II为Cy5,所述淬灭基团II为BHQ3淬灭剂。

3.如权利要求1所述的一种荧光化学传感器,其特征在于,所述hOGG1分子信标和hAAG分子信标茎结构碱基序列长度均为12~13个碱基。

4.如权利要求1所述的一种荧光化学传感器,其特征在于,所述荧光化学传感器还包括脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶。

5.如权利要求1所述的一种荧光化学传感器,其特征在于,所述hOGG1分子信标长度为

34nt,所述hOGG1分子信标的碱基序列为:5'-Cy3-GGT CTO ATG GGG GAC ACG ACA CCC CCA TCA GAC C-BHQ2-3',其中下划线标出的碱基序列即为hOGG1分子信标茎结构碱基序列,下划线标出的碱基O即8-羟基鸟嘌呤,所述hOGG1分子信标5'端标记有荧光基团Cy3,3'端标记有淬灭基团BHQ2。

6.如权利要求1所述的一种荧光化学传感器,其特征在于,所述hAAG分子信标长度为

34nt,所述hAAG分子信标的碱基序列为:5'-Cy5-CTC GIG GCA GCT CAG TAC AGG AAG CTG CCT CGA G-BHQ3-3',其中下划线标出的碱基序列即为hAAG分子信标茎结构碱基序列,下划线标出的碱基I即脱氧次黄嘌呤,所述hAAG分子信标5'端标记有荧光基团Cy5,3'端标记有淬灭基团BHQ3。

7.如权利要求1-6任一项所述荧光化学传感器用于同时检测hOGG1和hAAG的方法,其特征在于,具体包括:

1)将待测样品加入反应溶液I中进行孵育反应,然后进行高温灭活处理;

2)对步骤1)反应后的溶液进行荧光化学检测,实现对待测样品中hOGG1和hAAG的定量分析。

8.如权利要求7所述检测方法,其特征在于,步骤1)所述反应溶液I中包括hOGG1分子信标、hAAG分子信标和APE1酶;

步骤1)中孵育反应条件为:37℃,孵育时间为1~2h(优选为1.5h);高温灭活处理温度为80℃,处理时间为10~30min(优选为20min)。

9.如权利要求7所述的检测方法,其特征在于,步骤2)中采用荧光仪定量检测荧光强度,具体的,在535nm处激发Cy3并收集560nm处的信号,在635nm处激发Cy5并收集665nm处的信号。

10.权利要求1-6任一项所所述荧光化学传感器和/或权利要求7-9任一项所述检测方法在筛选hOGG1/或hAAG抑制剂/激活剂中的应用。