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专利号: 2017110225768
申请人: 湖南工程学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-18
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于核酸外切酶III的汞离子检测探针组,其特征在于,包括发夹DNA探针和汞离子识别探针;

所述发夹DNA探针为3’末端为单链游离端的茎环结构,包括G-四链体形成序列、互补序列和3’末端单链游离序列;所述G-四链体形成序列的5’端部分序列和5’端上游序列与G-四链体形成序列的3’端下游序列通过互补序列形成茎状区,所述发夹DNA探针的3’末端含2组重复序列,一组处于茎状区,另一组为3’末端单链游离序列;所述3’末端单链游离序列含有

2~4个连续的T碱基;

所述汞离子识别探针5’端含有2~4个连续的T碱基,所述T碱基在汞离子存在的情况下能够与发夹DNA探针3’末端单链游离序列中的T碱基形成T-Hg2+-T结构,且在所述发夹DNA探针的3’末端形成平末端。

2.根据权利要求1所述的探针组,其特征在于,所述发夹DNA探针的序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1或2所述的探针组,其特征在于,所述汞离子识别探针的序列如SEQ ID NO.2所示。

4.基于权利要求1~3任意一项所述探针组的汞离子检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1~3任意一项所述的探针组和核酸外切酶III。

5.基于权利要求1~3任意一项所述探针组或权利要求4所述试剂盒的汞离子检测方法,包括以下步骤:

1)将所述发夹DNA探针和汞离子识别探针混合于Tris-HCl缓冲液中,90℃保持10~

20min,冷却后,加入待测样品和核酸外切酶III,25℃自循环反应60~100min;

2)将所述步骤1)的自循环反应产物在80℃处理10min,使核酸外切酶III失活;

3)在所述步骤2)的失活体系中加入血红素和ABTS-H2O2,产生G-四链体-血红素DNA酶,催化ABTS-H2O2反应,生成ABTS●+,对汞离子进行吸光度检测。

6.根据权利要求5所述的检测方法,其特征在于,步骤1)所述冷却的条件为:70℃保持

10~15min;50℃保持25~30min;30℃保持10~15min;20~25℃保持20~30min。

7.根据权利要求5所述的检测方法,其特征在于,步骤1)发夹DNA探针在自循环反应体系中的浓度为0.10~0.25μM;汞离子识别探针在自循环反应体系中的浓度为0.03~0.10μM;发夹DNA探针和汞离子识别探针混合的浓度比为5:(1~3)。

8.根据权利要求5所述的检测方法,其特征在于,步骤1)核酸外切酶III在自循环反应体系中的浓度为0.10~0.20U/μL;发夹DNA探针与核酸外切酶III的体积比为(25~100):1。

9.根据权利要求5所述的检测方法,其特征在于,步骤3)催化ABTS-H2O2反应的催化条件为37℃反应8min。

10.根据权利要求5所述的检测方法,其特征在于,步骤3)所述吸光度检测为在420nm波长下进行。