1.一种羰基还原酶基因工程菌固定化细胞,其特征在于所述固定化细胞按如下方法制备:将羰基还原酶基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体用pH 7.0、100mM磷酸盐缓冲液悬浮,获得菌悬液;向菌悬液中加入活性炭,在20‑30℃,500rpm条件下水浴搅拌30min;再加入质量浓度5%聚乙烯亚胺水溶液,在20‑30℃,500rpm条件下水浴搅拌交联1h;然后加入质量浓度50%戊二醛水溶液,在20‑30℃,500rpm条件下水浴搅拌交联1h,抽滤,滤饼用pH 7.0、
100mM磷酸盐缓冲液清洗两次,抽滤去除缓冲液,即获得羰基还原酶基因工程菌固定化细胞;所述菌悬液中湿菌体含量为100g/L;所述活性炭加入量以菌悬液体积计为6‑24g/L;所述聚乙烯亚胺水溶液体积用量以菌悬液体积计为1‑5%;所述戊二醛水溶液体积用量以菌悬液体积计为1‑5%;所述羰基还原酶基因工程菌是由SEQ ID NO.1所示核苷酸序列以大肠杆菌为宿主菌构建而成;所述活性炭为颗粒活性炭,在加入前先进行预处理,所述预处理方法为:将活性炭过40目筛,再加入1M盐酸中,50℃搅拌1h,抽滤,用蒸馏水清洗滤液至中性,滤饼烘干,即为预处理后的活性炭。
2.如权利要求1所述羰基还原酶基因工程菌固定化细胞,其特征在于所述湿菌体按如下方法制备:将羰基还原酶基因工程菌接种至含有终浓度50μg/mL卡那霉素抗性的LB液体培养基,37℃,200rpm下培养8h,再以体积浓度1%接种量接种至新鲜的含有终浓度50μg/mL卡那霉素抗性的LB液体培养基中,于37℃,150rpm下培养至菌体OD600达0.6~0.8,加入终浓度为0.1mM的异丙基硫代半乳糖苷,28℃下诱导培养10h后,4℃、8000rpm离心10min,弃去上清液,收集湿菌体。
3.一种权利要求1所述羰基还原酶基因工程菌固定化细胞在不对称还原制备他汀类药物中间体中的应用。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述应用以羰基还原酶基因工程菌固定化细胞为催化剂,以(S)‑6‑氯‑5‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯或(R)‑6‑氰基‑5‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯为底物,以异丙醇为辅助底物,以pH 7的磷酸钾缓冲液或正己烷为反应介质构成反应体系,在20‑40℃、200~600rpm条件下反应完全后,获得含(3R,5S)‑6‑氯‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯或(3R,5R)‑6‑氰基‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯的混合液;将混合液抽滤回收固定化细胞,滤液分离纯化,即获得(3R,5S)‑6‑氯‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯或(3R,5R)‑6‑氰基‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于所述催化剂用量为80‑200g/L反应体系,异丙醇体积用量以反应体系总体积计为10‑50%,底物终浓度50‑200g/L反应体系。
6.如权利要求4所述的应用,其特征在于所述滤液分离纯化方法为下列之一:(1)当反应介质为磷酸钾缓冲液时,则将混合液抽滤回收固定化细胞,滤液先旋蒸至无液体流出,获得浓缩物,将浓缩物用乙酸乙酯萃取两次,合并有机层并用无水硫酸钠干燥、过滤获得滤液,将滤液旋蒸至无液体流出,干燥,获得(3R,5S)‑6‑氯‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯或(3R,
5R)‑6‑氰基‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯;(2)当反应介质为正己烷时,则将混合液抽滤回收固定化细胞,滤液用无水硫酸钠干燥、过滤,获得滤液,将滤液旋蒸至无液体流出,干燥,获得(3R,5S)‑6‑氯‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯或(3R,5R)‑6‑氰基‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯。