1.一种羰基还原酶LsCR突变体,其特征在于,所述羰基还原酶LsCR突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列突变为下列之一:(1)第101位天冬酰胺突变为天冬氨酸;(2)117位的丙氨酸突变为甘氨酸;(3)147位的苯丙氨酸突变为亮氨酸;(4)145位谷氨酸突变为丙氨酸;
(5)第101位天冬酰胺突变为天冬氨酸,117位的丙氨酸突变为甘氨酸,147位的苯丙氨酸突变为亮氨酸;(6)第101位天冬酰胺突变为天冬氨酸,117位的丙氨酸突变为甘氨酸,147位的苯丙氨酸突变为亮氨酸,145位谷氨酸突变为丙氨酸。
2.一种权利要求1所述羰基还原酶LsCR突变体的编码基因。
3.一种权利要求1所述羰基还原酶LsCR突变体编码基因构建的重组基因工程菌。
4.一种权利要求1所述羰基还原酶LsCR突变体在不对称还原羰基化合物制备手性醇中的应用,其特征在于,所述羰基化合物为下列之一:对溴苯乙酮、对氯苯乙酮、对氟苯乙酮、邻氯苯乙酮、邻溴苯乙酮、邻氟苯乙酮、邻三氟甲基苯乙酮、2,6‑二氯苯乙酮、2,3',4'‑三氯苯乙酮、2‑氯苯乙酮、2‑羟基苯乙酮、苯乙酮、2‑氯‑1‑(3,4‑二氟苯基)乙酮。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于所述应用的方法为:将含羰基还原酶LsCR突变体基因的工程菌经诱导培养获得的湿菌体或湿菌体超声破碎提取的纯酶液为催化剂,以羰基化合物为底物,以异丙醇为辅底物,以pH4‑9的缓冲液为反应介质构成反应体系,在20‑50℃、400~800 rpm条件下进行反应,反应结束,反应液使用乙酸乙酯萃取,获得手性醇化合物。
6.如权利要求5所述的应用,其特征在于,所述反应体系中,底物终浓度1~600 g/L,异丙醇体积浓度为10‑80%,催化剂用量以湿菌体干重计为1~30g DCW/L。
7.如权利要求5所述的应用,其特征在于,所述底物为2‑氯‑1‑(3,4‑二氟苯基)乙酮时,反应介质为pH6‑7、100mM的PBS缓冲液,在30‑45℃、800rpm下反应制备产物(1S)‑2‑氯‑1‑(3,4‑二氟苯基)乙醇。
8.如权利要求5所述的应用,其特征在于,所述湿菌体按如下方法制备:将含羰基还原酶LsCR突变体基因的工程菌接种到含有终浓度50 μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,37℃培养10 h,获得种子液;将种子液以体积浓度1%的接种量接种到新鲜的含终浓度50 μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,37℃、180 rpm培养2h,再向培养液中加入终浓度为0.15 mM异丙基硫代半乳糖苷,28℃培养12 h后,4℃、8000 rpm离心10 min,获得湿菌体。
9.如权利要求5所述的应用,其特征在于,所述纯酶液按如下方法制备:(1)将湿菌体按
50 g湿菌体/L缓冲液重悬于pH 7.0、100 mM PBS缓冲液中,菌悬液在冰水混合物上超声破碎15 min,超声破碎条件:功率250 W,破碎1 s,暂停1 s,取破碎混合液,获得粗酶液;(2)粗酶液在8000 rpm、4 ℃下离心10 min,弃沉淀,收集上清液;上清液经0.22μm滤膜微滤后,上样经缓冲液 A平衡后的DEAE Sepharose Fast Flow 阴离子交换柱,使用缓冲液A淋洗直至基线平衡,去除未结合蛋白;依次使用缓冲液 A、缓冲液 B进行线性梯度洗脱3‑5个柱体积,洗脱速度为1mL/min,收集具有活性的目标洗脱峰的流出液,用pH 7.0、20 mM磷酸钾缓冲液透析16‑20 h,收集截留液即为纯酶液;所述缓冲液A为 pH 7.5、20mM Tris‑HCl缓冲液;所述缓冲液 B为含有1 M 氯化钠的pH 7.5、20mM Tris‑HCl缓冲液。