利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2017107994543
申请人: 集美大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-10-22
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种从法夫酵母中分离纯化β-胡萝卜素的方法,其特征在于:包括如下步骤:S1、制备类胡萝卜素粗提物:准确称取10g法夫酵母菌体,加入200mL的6mol/L乳酸溶液,30℃破壁10min,破壁后4500rpm离心10min,去除粘稠的乳酸溶液,量取200mL蒸馏水加入剩余的菌体中,搅拌均匀,4500rpm离心10min,去除上层蒸馏水,反复水洗3次,保留菌体于杯底,加入200mL丙酮溶液,常温浸提5min,4500rpm离心10min,收集上清液,旋转蒸发后即得到类胡萝卜素粗提物;

S2、配置HSCCC溶剂体系:按照正己烷:丙酮:乙醇:水的体积比为1.2:1:1:0.8的比例量取各溶剂于分液漏斗中,并在15-25℃下充分震荡,静置分层,分别收集上相和下相溶液,超声20min,以上相作为HSCCC的流动相,下相作为HSCCC的固定相;

S3、洗脱:以上相作为HSCCC的流动相,下相作为HSCCC的固定相,采用正向模式,即从尾到头进行洗脱,首先将下相溶液固定相以30mL/min的流速泵满色谱柱,将转数调至350-

850rpm后,以1-15mL/min的流速将上相溶液流动相泵入色谱柱中;

S4、进样:待主机螺旋管内流动相与固定相达到动力学平衡,即检测器端口只有流动相被置换出时,可准备进样,样品进样环注入管路的同时点下色谱工作站中的记录按钮,紫外检测波长设置为474nm,根据紫外吸收色谱图手动收集各馏分;

S5、硅胶柱层析分离:将HSCCC分离得到的各个组分用正相硅胶柱层析进一步分离,将硅胶置于80℃烘箱活化2h,称取22.1g活化的200-300目的硅胶于烧杯中,加入100mL石油醚搅拌均匀,湿法装柱,柱子规格为35×1.5cm的玻璃柱,待硅胶自然沉降,石油醚平衡至柱体积不再变化,最后装填高度为25.1cm,将样品溶于少量的二氯甲烷,湿法上样,用不同比例的石油醚/丙酮进行梯度洗脱,按条带收集组分;

S6、组分鉴定:将步骤S4收集到的组分按顺序编号,以β-胡萝卜素标准品作为对照,利用高效液相色谱、质谱的方法进行鉴定,通过分析各编号样品与β-胡萝卜素的质谱图,即可确定某一编号对应的组分为β-胡萝卜素。

2.根据权利要求1所述的一种从法夫酵母中分离纯化β-胡萝卜素的方法,其特征在于:步骤S2中所述的充分震荡的温度优选25℃。

3.根据权利要求1所述的一种从法夫酵母中分离纯化β-胡萝卜素的方法,其特征在于:步骤S3中所述的流动相的流速优选3mL/min。

4.根据权利要求1所述的一种从法夫酵母中分离纯化β-胡萝卜素的方法,其特征在于:步骤S3中所述的转数优选850rpm。

5.根据权利要求1所述的一种从法夫酵母中分离纯化β-胡萝卜素的方法,其特征在于:步骤S4中所述的进样,其样品的浓度为20mg/mL,样品的量为10mL。

6.根据权利要求1所述的一种从法夫酵母中分离纯化β-胡萝卜素的方法,其特征在于:步骤S5中所述的用不同比例的石油醚/丙酮进行梯度洗脱,其洗脱条件为:按体积百分比:

100%石油醚200mL,98%石油醚+2%丙酮200mL,95%石油醚+5%丙酮400mL,92%石油醚+

8%丙酮100mL,85%石油醚+15%丙酮100mL,80%石油醚+20%丙酮300mL。