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专利号: 2017107149330
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-11-04
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种含重组耐高温葡萄糖异构酶细胞的固定化方法,其特征在于所述方法为:将含耐高温葡萄糖异构酶基因的重组基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体用pH值6.5-7.5的缓冲液制成菌悬液;向菌悬液中添加硅藻土,搅拌混匀,再加入聚乙烯亚胺室温搅拌絮凝1~

2h,然后加入三羟甲基磷,在0~30℃、100r/min搅拌交联1~2h后,抽滤,滤饼室温风干后粉碎成粒,得到所述含耐高温葡萄糖异构酶固定化细胞颗粒;所述硅藻土与菌悬液中湿菌体重量比为0.01~0.1:1。

2.如权利要求1所述含重组耐高温葡萄糖异构酶细胞的固定化方法,其特征在于所述耐高温葡萄糖异构酶基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.2,编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.如权利要求1所述含重组耐高温葡萄糖异构酶细胞的固定化方法,其特征在于所述缓冲液为pH 6.5~7.5、50mM的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液,所述缓冲液体积用量以湿菌体湿重计为5~15mL/g。

4.如权利要求1所述含重组耐高温葡萄糖异构酶细胞的固定化方法,其特征在于所述三羟甲基磷以体积浓度30%水溶液形式加入,体积用量以湿菌体重量计为0.01~0.3mL/g。

5.如权利要求1所述含重组耐高温葡萄糖异构酶细胞的固定化方法,其特征在于所述聚乙烯亚胺以体积浓度5%水溶液形式加入,体积用量以湿菌体重量计为0.1~0.7mL/g。

6.如权利要求1所述含重组耐高温葡萄糖异构酶细胞的固定化方法,其特征在于所述湿菌体按如下方法制备:将含重组耐高温葡萄糖异构酶基因的工程菌接种至含100μg/mL卡那霉素的LB液体培养基,于37℃、150r/min培养10h,获得种子液;将种子液以体积浓度2-

5%的接种量接种到含3L发酵培养基的5L发酵罐中,于37℃、500r/min、1.33vvm、罐压

0.05Mpa条件下发酵3.5h,发酵过程用氨水和磷酸调节pH为7.0,再将发酵罐温度降低至28℃,加入终浓度10g/L乳糖继续发酵10h,离心收集湿菌体;所述发酵培养基组成为:胰蛋白胨15g/L、酵母粉12g/L、NaCl 10g/L、甘油12g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、硫酸铵5g/L、三水合磷酸氢二钾2.3g/L、氯化锰3.8g/L、溶剂为水,pH值自然。