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专利号: 201710532106X
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种式(1)所示的石杉碱甲衍生物,其特征在于,所述石杉碱甲衍生物为白色无定型粉末,分子式为C19H24N2O2,分子结构中含有石杉碱甲和丁酮结构片段,两结构片段通过石杉碱甲的游离氨基和丁酮2′位形成碳氮键相连而成,

2.一种权利要求1所述石杉碱甲衍生物的制备方法,其特征在于,所述方法利用一株蛇足石杉内生真菌对石杉碱甲进行生物转化,将蛇足石杉内生真菌接种至发酵培养基,同时加入石杉碱甲,在25-28℃、180~200rpm条件下发酵培养14天,取发酵液进行分离纯化,获得所述石杉碱甲衍生物;所述发酵培养基组成为碳源5-30g/L、氮源10-25g/L、无机盐1-5g/L,溶剂为水,pH值自然,所述蛇足石杉内生真菌为白囊耙齿菌(Irpexlacteus) ZJUT-HS39,该菌株已保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCCM2017161,保藏日期为2017年

3月31日,保藏单位地址为中国,武汉,武汉大学,所述碳源为葡萄糖,所述氮源为马铃薯浸出粉,所述无机盐为磷酸氢二钾或磷酸二氢钾。

3.如权利要求2所述的石杉碱甲衍生物的制备方法,其特征在于,所述加入发酵培养基的石杉碱甲预先溶解于无水乙醇,浓度10mg/mL,并在无菌条件下经0.22μm微孔滤膜过滤,其在发酵液中的终浓度为0.03-0.2mg/mL。

4.如权利要求2所述的石杉碱甲衍生物的制备方法,其特征在于,蛇足石杉内生真菌(Irpexlacteus) ZJUT-HS39发酵液制备方法为:(1)将蛇足石杉内生真菌(Irpexlacteus) ZJUT-HS39接种至斜面培养基,在25-28℃培养5-7天,获得斜面菌体;所述斜面培养基组成为:葡萄糖10-30g/L,马铃薯浸出粉5-25g/L,KH2PO40.5-2g/L,琼脂10-20g/L,溶剂为水,pH值自然;(2)将斜面菌体接种至种子培养基,在25-28℃、180-200rpm、体积装液量30%条件下培养7天,获得种子液;所述种子培养基组成为:葡萄糖10-50g/L,马铃薯浸出粉5-25g/L,KH2PO40.5-2g/L,溶剂为水,pH值自然;(3)将种子液以体积分数5-10%的接种量接种至发酵培养基,体积装液量30%条件下培养14天,获得发酵液。

5.如权利要求2所述的石杉碱甲衍生物的制备方法,其特征在于,所述发酵液分离纯化方法为:(1)将发酵液过滤除去菌丝,用氨水调节发酵液pH至9-11,用氯仿萃取3次,合并有机层,减压浓缩至无液体流出,得氯仿萃取物;(2)将步骤(1)氯仿萃取物经MCICHP20P树脂柱层析,依次用体积比5:5的甲醇-水溶液、体积比6:4的甲醇-水溶液、体积比7:3的甲醇-水溶液、体积比8:2的甲醇-水溶液和体积比9:1的甲醇-水溶液洗脱,每个洗脱液洗脱2个柱体积,收集体积比5:5的甲醇-水溶液的流出液;(3)将步骤(2)收集的流出液浓缩至干,用ODSC18柱层析进行纯化,依次用体积比3:7的甲醇-水溶液和体积比4:6的甲醇-水溶液洗脱,每个洗脱液均洗脱2个柱体积,薄层层析检测各个流出液,合并含目标组分的流出液,减压浓缩即得石杉碱甲衍生物。