1.一种快速获得黑果枸杞再生苗的培育方法,其特征在于:所述方法是直接由黑果枸杞的无菌种苗获得愈伤组织,再经组织培养培育得到黑果枸杞再生苗。
2.根据权利要求1所述的快速获得黑果枸杞再生苗的培育方法,其特征在于:所述方法包括如下步骤:(1)种子的消毒
选取黑果枸杞种子,依次经消毒剂消毒及无菌水冲洗后备用;
(2)无菌种苗的获得
将步骤(1)的种子置于MS-0培养基中,待所述种子萌发8~12天后得到无菌种苗;
所述MS-0培养基是通过向每升MS培养基中添加30g蔗糖和8.0g琼脂而得,所述MS-0培养基的pH值为5.0~5.5;
(3)愈伤组织的诱导
将步骤(2)的无菌种苗移栽至MS-1培养基中以诱导形成愈伤组织,培养条件为:温度23~27℃、光照12h/d、培养基pH值为5.0~5.5,培养35~45天;
所述MS-1培养基是通过向每升MS培养基中添加0.5~1.0mgNAA、1.5~2.5mg 6-BA、30g蔗糖及8.0g琼脂而得;
(4)不定芽的获得
将步骤(3)的愈伤组织从外植体上剥离下来后置于MS-2培养基中以诱导分化不定芽,培养条件为:温度23~27℃、光照14h/d、培养基pH值为5.0~5.5,增殖培养3~5代;
所述MS-2培养基是通过向每升MS培养基中添加0.5~1.0mgNAA、0.5~1.4mg 6-BA、30g蔗糖及6.0g琼脂而得;
(5)根的诱导
将步骤(4)的不定芽移栽到所述MS-0培养基中以诱导生根,即得黑果枸杞再生苗;
培养条件为:温度23~27℃、光照14h/d、培养时间17~22天。
3.根据权利要求2所述的快速获得黑果枸杞再生苗的培育方法,其特征在于:步骤(1)中的消毒环节为,先用70v%的酒精浸泡3~7min,再用0.1wt%的氯化汞溶液消毒10~
20min。
4.根据权利要求2或3所述的快速获得黑果枸杞再生苗的培育方法,其特征在于所述氯化汞溶液消毒的时间为15min。
5.根据权利要求2-4任一项所述的快速获得黑果枸杞再生苗的培育方法,其特征在于:所述MS培养基的配制方法包括,将MS微量元素母液、MS肌醇母液、MS铁盐母液分别稀释100倍后与稀释了40倍的MS大量元素母液混合;
所述MS微量元素母液、MS肌醇母液、MS铁盐母液、MS大量元素母液的体积之比为5:5:5:
2;
所述MS大量元素母液的组成为,每升无菌水中含KNO3 76.0g、NH4NO3 66.0g、MgSO4·
7H2O 14.8g、CaCl2·2H2O 17.6g、无水CaCl2 13.28g;
所述MS微量元素母液的组成为,每升无菌水中含MnSO4·H2O 2.23g、ZnSO4·7H2O
0.86g、H3BO3 0.62g、KI 0.083g、Na2MoO4·2H2O 0.025g、CuSO4·5H2O 0.0025g、CoCl2·6H2O
0.0025g;
所述MS肌醇母液的组成为,每升无菌水中含肌醇10.0g、烟酸0.1g、Vit B1 1.0g、Vit B6
0.1g;
所述MS铁盐母液的组成为,FeSO4·7H2O 2.78g、Na2EDTA 3.73g。
6.根据权利要求2-5任一项所述的一种快速获得黑果枸杞再生苗的培育方法,其特征在于:所述MS-0培养基、MS-1培养基、MS-2培养基的pH值均为5.2。
7.根据权利要求2-6任一项所述的一种快速获得黑果枸杞再生苗的培育方法,其特征在于:每升所述MS-1培养基中含NAA 1.0mg、6-BA 2.0mg。
8.根据权利要求2-7任一项所述的一种快速获得黑果枸杞再生苗的培育方法,其特征在于:每升所述MS-2培养基中含NAA 1.0mg、6-BA 1.0mg。
9.根据权利要求2-8任一项所述的一种快速获得黑果枸杞再生苗的培育方法,其特征在于:还包括将步骤(5)得到的生根苗转入大棚内炼苗至少2周的步骤。