1.一种扁果枸杞组织培养再生体系的建立方法,其特征在于,所述的方法包括以下步骤:
A、制备外植体:采用扁果枸杞无菌实生苗或无菌扦插苗的叶作为外植体,无菌手术刀将叶切成方块状;接种到愈伤组织诱导培养基中培养3周得到有愈伤组织的叶组织块;所述愈伤组织诱导培养基由MS培养基、30g/L的蔗糖、0.2mg/L的 6‑BA、1.0mg/L的 NAA、5.5g/L的琼脂组成;所述愈伤组织诱导培养基的pH=5.8;
B、愈伤组织诱导培养:将步骤A的得到的叶组织块,接入新鲜的愈伤组织诱导培养基中培养4周,诱导出愈伤组织;
C、丛芽分化诱导培养:将步骤B得到的愈伤组织转接到丛芽分化培养基中培养4‑5周,长出丛芽,当不定芽长出4‑6片叶时用于生根诱导;所述丛芽分化培养基由 MS培养基、30g/L的蔗糖、0.2mg/L的NAA、5.5g/L的琼脂组成; 所述丛芽分化培养基的pH=5.8;
D、生根诱导培养:将步骤C的长出4‑6片叶的丛芽接到生根培养基上培养2周,长出不定根;所述生根培养基由 1/2MS培养基、30g/L的蔗糖、0.2mg/L的NAA、5.5g/L的琼脂组成; 所述生根培养基的pH=5.8;
E、组培苗驯化移栽:当步骤D的不定芽长成幼苗,幼苗长至4~6cm高时,揭开培养瓶上的封口膜,晾3‑5天后,取出幼苗,洗去根部的琼脂,移栽入营养土中,完成再生体系的建立;
所述MS培养基为1900mg/L KNO3、1650mg/L NH4NO3、370mg/L MgSO4·7H2O、170mg/L KH2PO4、440mg/L CaCL2·2H2O、22.3mg/L MnSO4·4H2O、8.6mg/L ZnSO4·7H2O 、6.2mg/L H3BO3、0.83mg/L KI、0.25mg/L Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L CuSO4·5H2O、0.025mg/L CoCl2·
6H2O、37.3mg/L Na2‑EDTA、27.8mg/L FeSO4·4H2O、2.0mg/L 甘氨酸、0.1mg/L 盐酸硫胺素、
0.5mg/L 盐酸吡哆醇、0.5mg/L 烟酸和100mg/L 肌酸。
2.如权利要求1所述的扁果枸杞组织培养再生体系的建立方法,其特征在于,在步骤A中,所述扁果枸杞无菌实生苗的培养方法如下:(1)挑选成熟饱满的种子,将其放在三角瓶中,三角瓶中加入洗洁精和无菌水,震荡洗涤6‑10min;(2)在超净工作台上用2% 次氯酸钠浸泡8‑10min,后用无菌水冲洗5‑8次;(3)用75%的无水乙醇震荡洗涤两次,每次30s,无菌水冲洗5‑8次;(4)冲洗干净后,用无菌滤纸吸干扁果枸杞种子表面水分,将种子接种于有MS 培养基的培养瓶中;(5)每瓶接种 5粒种子,黑暗培养5‑7d待种子萌发后移入人工气候箱培养4周,得到无菌实生苗。
3.如权利要求1所述的扁果枸杞组织培养再生体系的建立方法,其特征在于,在步骤A中,取无菌实生苗从顶芽向下第4和第5茎节处的叶,剪成0.3cm×0.3cm的叶组织块。
4.如权利要求2所述的扁果枸杞组织培养再生体系的建立方法,其特征在于,所述无菌实生苗培养在温度25±2℃,光照/黑暗周期为 16h/8h,光照强度 1800Lx的条件下进行。
5.如权利要求1‑4任一项所述的扁果枸杞组织培养再生体系的建立方法,其特征在于,步骤B、C、D所述的愈伤组织诱导培养、丛芽分化诱导培养、生根诱导培养均在温度25±2℃,光照/黑暗周期为 16h/8h,光照强度 1800Lx的条件下进行。
6.如权利要求1所述的扁果枸杞组织培养再生体系的建立方法,其特征在于,步骤A、C、D中采用1mol/L NaOH调节培养基pH。