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专利号: 2017100580551
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-30
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种定点突变改造的精氨酸脱亚胺酶突变体,称之为基因工程精氨酸脱亚胺酶,其氨基酸序列为SEQ ID No.1。

2.权利要求1所述的定点突变的精氨酸脱亚胺酶突变体的基因DNA,其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.一种重组质粒,其特征在于其包含了权利要求2所述的DNA分子。

4.一种宿主细胞,其特征在于其含有如权利要求2所述的DNA分子,或含有如权利要求3所述的重组质粒。

5.根据权利要求1所述的精氨酸脱亚胺酶突变体,其特征在于,将含有通过B-FITTER预测获得的氨基酸突变点的精氨酸脱亚胺酶突变质粒转入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)宿主中,构建突变体,进行序列验证确认,得到最适pH和pH稳定性趋近与生理中性pH 

7.4的突变体Gly264Pro。

6.根据权利要求1所述的精氨酸脱亚胺酶突变体,其特征在于,其第264位甘氨酸Gly突变为脯氨酸Pro。

7.权利要求1所述的精氨酸脱亚胺酶突变体的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:以来自于大肠杆菌宿主携带的精氨酸脱亚胺酶基因的重组质粒为模版,以带有突变位点的寡聚核苷酸序列为引物,进行反向PCR,扩增突变质粒全长;使用Dpn Ⅰ限制性内切酶进行消化;取经过Dpn Ⅰ限制性内切酶处理的PCR产物热激转化E coli DH5α,涂布于含有卡那霉素抗性的固体LB培养基上培养;挑取固体LB培养基上的单菌落,接入含卡那霉素抗性的液体LB培养基中,提取质粒,测序;将测序结果正确的质粒转化入大肠杆菌E. coli BL21(DE3)感受态细胞中,获得突变体基因工程精氨酸脱亚胺酶。

8.权利要求1所述精氨酸脱亚胺酶突变体的应用,其特征在于,所述的精氨酸脱亚胺酶突变体用于药用抗肿瘤活性及相关药理活性研究。