1.一种藤黄球菌固定化小球的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将-70℃保存的藤黄球菌(Micrococcus Luteus IAM14879)接种至液体复活培养基中培养,其液体复活培养基组成是:3-5g的蛋白胨,2-4g的酵母膏,1.0-2.0g的矿质盐溶液,pH为6.5-7.5;30℃培养24-48h,获得活化后的种子培养液。
(2)将步骤(1)获得的种子液接种至LMM液体培养基中进行扩大培养,使其培养液OD600nm为0.3-0.6,将菌液在6000-9000r/min下离心10-20min,收集菌体,用磷酸盐缓冲溶液(1×PBS)洗涤2-4次,加入PBS制备OD600nm为0.3-0.6的菌悬液。
(3)将步骤(2)获得的菌悬液与一定量的多孔土质滤材充分混合,然后与一定量海藻酸钠溶液混合均匀,得到藤黄球菌-海藻酸钠-多孔土质滤材混合溶液,其中,藤黄球菌、海藻酸钠和多孔土质滤材的质量浓度分别为5.0-7.0%、2.0-3.5%和0.5-1.5%。
(4)在步骤(3)所获的藤黄球菌-海藻酸钠-多孔土质滤材混合液中逐滴加入固定剂CaCl2溶液,使得CaCl2的最终质量分数为3.5-5.0%,边搅拌边滴加,滴加速度为1.5-2.0mL/min,得到凝胶颗粒;将凝胶颗粒在空气中静置0.5-1.5h后,浸没于4℃,质量分数为3.0%-
4.5%的CaCl2溶液中交联2-4h,获得直径为2-4mm的固定化小球,之后用无菌蒸馏水冲洗3-
4次,得到藤黄球菌固定化小球于4℃保存备用。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,最佳包埋条件为(质量浓度):包埋藤黄球菌量为6.5%、固定化载体多孔土质滤材为1.0%、包埋剂海藻酸钠为2.5%、固定剂CaCl2为
4%;固定剂的滴加速度为1.5mL/min,凝胶颗粒放置时间为1.5h,浸没于4℃、质量分数为
4.5%的CaCl2溶液中,交联时间为4h。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述矿质盐溶液的配方如下:0.375g/L的CuSO4·5H2O,0.785g/L的MnCl2·4H2O,0.18g/L的FeSO4·7H2O,0.029g/L的Na2MoO4·2H2O,
0.089g/L的ZnSO4·7H2O,溶剂为水。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述多孔土质滤材由火山灰性土烧制成,空隙直径为0.1-4.0μm,每升比表面积1-5万M2、颗粒直径1-10mm。
5.一种权利要求1所述方法得到的藤黄球菌固定化小球在降解有毒有机污染物中的应用,其特征在于,该应用具体为:将藤黄球菌固定化小球固定化小球浸泡在液体复活培养基
20-25h。然后将固定化小球置于废水中,其固定化小球体积与废水的体积比为1:1000-1:
100。