1.芋疫霉菌环介导等温扩增检测引物,其特征在于,所述引物包括1对外侧引物PcoF3/PcoB3和1对内侧引物PcoFIP/PcoBIP,其序列为:外侧引物:
PcoF3:5’-ACTCGTCATCCACCTGAGT- 3’,PcoB3:5’-CCACTGCTTGACGTTGTTGA- 3’;
内侧引物:
PcoFIP:5’-AATCGTGCGGAAACGCTCCTGTGGTTGTGCCAACTCCCT- 3’,PcoBIP:5’-CTAGCAGCTACTACCGTGGTGCCTCTTGGTCCGTCACATCG- 3’。
2.利用权利要求1所述引物的芋疫霉菌LAMP检测方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)提取待测样品基因组DNA;
(2)LAMP反应体系的建立:以步骤(1)提取的DNA为模板,利用权利要求1所述的外侧引物PcoF3/PcoB3和内侧引物PcoFIP/PcoBIP进行LAMP扩增,LAMP检测反应体系为25 μL,包括
5 μM外侧引物PcoF3和PcoB3各1.0 μL,40 μM内侧引物PcoFIP和PcoBIP各1.0 μL,LAMP反应混合液12.5μL,8 U Bst聚合酶1.0 μL,DNA模板1.0 μL,用灭菌超纯水补足至25μL;
(3)LAMP反应条件:64 ℃温育60 min,85℃灭活5min;
(4)反应结果的测定:采用荧光染料目测观察法或琼脂糖凝胶电泳法进行测定;
采用荧光染料目测观察法,待LAMP反应结束后,在LAMP反应的扩增产物中加入显色剂SYBR greenⅠ1.0 μL,显色结果观察到绿色荧光的判断为阳性,橙色或橘黄色判断为阴性;
采用琼脂糖凝胶电泳法,取2.0 μL LAMP扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测,如出现梯形条带判断为阳性,没有出现条带则判断为阴性。
3. 根据权利要求2所述的芋疫霉菌LAMP检测方法,其特征在于,步骤(2)所述的LAMP反应混合液由以下组分组成:40 mM Tris-HCl,20 mM (NH4)2SO4,20 mM KCl,16 mM MgSO4,
1.6 mol/L甜菜碱,2.0 mM dNTPs,0.2wt.% Trion X-100。
4.如权利要求1所述的引物在田间芋头疫病的早期诊断和病菌的监测、鉴定上的应用。