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专利号: 2016101912437
申请人: 江苏大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-11-07
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种单宁酸为模板的介孔硅固定化胰蛋白酶的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

步骤1、一定质量的单宁酸加入到无水乙醇中,然后加入一定体积质量分数为25~28%的氨水,强烈搅拌,加入一定体积的正硅酸四乙酯,搅拌2h,然后一定体积的氨丙基三乙氧基硅烷加入到混合溶液中,室温搅拌24h,反应后依次用无水乙醇和水洗涤5次以洗脱未反应的单宁酸、氨水和氨丙基三乙氧基硅烷,将产物在25℃下干燥,得到外表面氨丙基三乙氧基硅烷修饰的以单宁酸为模板的介孔硅,简称为APTES@MSN;

步骤2、用磷酸盐缓冲液溶解胰蛋白酶,制成胰蛋白酶溶液,然后加入步骤1得到的APTES@MSN,放入振荡器中,37℃振荡3~5h,振荡速率为150~200rpm;然后将固体取出浸没于醋酸钠缓冲液2~3h以洗去外表面固定化的胰蛋白酶,最后以磷酸盐缓冲液抽洗至滤液中检测不到胰蛋白酶即得到单宁酸为模板的介孔硅固定化胰蛋白酶。

2.根据权利要求1所述的一种单宁酸为模板的介孔硅固定化胰蛋白酶的制备方法,其特征在于,步骤1中,单宁酸,无水乙醇,氨水,正硅酸四乙酯(TEOS)和氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)的用量比为68~272mg:50mL:25mL:0.3mL:0.1~0.3mL。

3.根据权利要求1所述的一种单宁酸为模板的介孔硅固定化胰蛋白酶的制备方法,其特征在于,步骤2中,所述的胰蛋白酶溶液中胰蛋白酶的浓度为1mg/mL,所加入的APTES@MSN的用量与胰蛋白酶的用量关系为:每1g胰蛋白酶加入0.5~2g APTES@MSN。

4.根据权利要求1所述的一种单宁酸为模板的介孔硅固定化胰蛋白酶的制备方法,其特征在于,步骤2中,所述的磷酸盐缓冲液浓度为20mmol/L,pH为7.0~8.0。

5.根据权利要求1所述的一种单宁酸为模板的介孔硅固定化胰蛋白酶的制备方法,其特征在于,步骤2中,所述的醋酸钠缓冲液浓度为20mmol/L,pH为3.0~3.5。