1.一种快速鉴别硫酸软骨素A和C的方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1、提取鉴别样品的硫酸软骨素,制备粗多糖干粉试样;
S2、待测试样利用三氟乙酸水解,所得水解物利用水或甲醇重复三次减压除去溶剂,除酸至中性;
S3、将S2所得残余物用氨水溶解,加入1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化,萃取得到供试液;
S4、取硫酸软骨素对照品以相同操作参数重复步骤S2和S3,对照品试样中硫酸软骨素的含量与S1制备的粗多糖干粉试样中硫酸软骨素含量基本相等;
S5、采用液相色谱-质谱技术分析S3和S4的衍生物:
液相色谱-质谱分析条件包括:以乙腈/20mM乙酸铵水溶液为流动相,使用配备反相硅胶柱的液相色谱-质谱,采用正离子模式,选择带有硫酸基二糖片段的衍生物的准分子离子;
S6、选择色谱峰保留时间和质谱数据比对,从而推断样品中硫酸软骨素的种类。
2.根据权利要求1所述的一种快速鉴别硫酸软骨素A和C的方法,其中,所述的步骤S1中采用直接水提法或酶解后醇沉法提取样品中的多糖,使游离的硫酸软骨素含量大于5%。
3.根据权利要求1所述的一种快速鉴别硫酸软骨素A和C的方法,其中,所述的步骤S2中用0.1~2mol/L的三氟乙酸溶解,100~120℃加热1~1.5h;待测试样的硫酸软骨素含量与三氟乙酸、水或甲醇的质量体积比(mg/mL/mL)0.5~10:1:0.5~1。
4.根据权利要求3所述的一种快速鉴别硫酸软骨素A和C的方法,其中,所述的步骤S2中三氟乙酸浓度为0.2mol/L,水解温度100℃,水解时间为1h。
5.根据权利要求1所述的一种快速鉴别硫酸软骨素A和C的方法,其中,所述的步骤S3中采用0.3mol/L的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)甲醇溶液70℃水浴30min,加入水或甲醇,减压除去溶剂;待测试样的硫酸软骨素含量与氨水、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)甲醇溶液、水或甲醇的质量体积比(mg/μL/μL/mL)0.5~10:200~400:200~400:0.5~1。
6.根据权利要求1所述的一种快速鉴别硫酸软骨素A和C的方法,其中,所述的步骤S3中萃取为利用氯仿,重复萃取三次。
7.根据权利要求6所述的一种快速鉴别硫酸软骨素A和C的方法,其中,所述的步骤S3中萃取为加入水,再加入氯仿,震荡后除去氯仿,重复三次,水层作为供试液;待测试样的硫酸软骨素含量与水、氯仿的质量体积比(mg/mL/mL)0.5~10:1:1。
8.根据权利要求3或5或7所述的一种快速鉴别硫酸软骨素A和C的方法,其中,所述的待测试样的硫酸软骨素含量为0.5~10mg。
9.根据权利要求1所述的一种快速鉴别硫酸软骨素A和C的方法,其中,所述的步骤S5中液相色谱-质谱技术选择m/z 766.2±0.5的离子。
10.根据权利要求1或9所述的一种快速鉴别硫酸软骨素A和C的方法,其中,所述的步骤S5中液相色谱-质谱技术的液质条件如下:Silgreen ODS C18(250×4.6mm,5μm)色谱柱;柱温30℃;流动相20mmol乙酸铵水溶液-乙腈(78:22,V/V);流速1mL/min;离子源ESI源;喷雾电压4.5kV;毛细管温度为275℃;毛细管电压为37V;鞘气:40Au;辅助气:10Au;扫描方式为全扫描(Full Scan);扫描范围为100-2000(m/z)。