利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2015109105249
申请人: 三明学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-04-09
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种获得已知序列侧翼未知序列的方法,其特征在于:包括如下步骤:(1)选择已知序列,设计两条方向一致的特异性引物,从远离边界序列到靠近边界序列的顺序依次标记为SP1和SP2,SP2带限制性内切酶识别位点,在SP2到边界序列之间再设计一对反向PCR引物F1和D1;

(2)以基因组DNA为模板,以6种兼并引物AD分别和所述SP1进行第一轮PCR扩增,得到有扩增条带的PCR产物1;

(3)以所述的有扩增条带的PCR产物1为模板,使用特异的SP2引物和步骤(2)中同种但加入限制性内切酶识别位点的相对应的兼并引物AD’扩增得到PCR产物2;

(4) 将PCR产物2酶切后加入T4连接酶环化,以此为模板,使用F1和D1为引物,扩增得到PCR产物3,从所述PCR产物3中获得侧翼序列。

2.根据权利要求1所述的一种获得已知序列侧翼未知序列的方法,其特征在于:所述兼并引物AD及加入限制性内切酶识别位点的兼并引物AD’为如下:AD1:NTCGASTWTSGWGTT、AD’1:NTCGASTWTSGWGTTCCCGGG ;

AD2:NGTCGASWGANAWGAA、 AD’2 :NGTCGASWGANAWGAACCCGGG;

AD3:NGTASASWGTNAWCAA、 AD’3:NGTASASWGTNAWCAACCCGGG;

AD4:STTGNTASTNCTNTGC、AD’4:STTGNTASTNCTNTGCCCCGGG ;

AD5:AGWGNAGWANCAWAGG、 AD’5:AGWGNAGWANCAWAGGCCCGGG;

AD6 :TGWGNAGWANCASAGA、 AD’6:TGWGNAGWANCASAGACCCGGG。