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专利号: 2015105816133
申请人: 大连工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种南极磷虾油中虾青素含量的测定方法,其特征在于,包括如下步骤:S1、称取两份重量相同的南极磷虾油,每份0.2~0.5g,其中一份添加1ml虾青素标准品;

所述虾青素标准品的浓度为1.0、2.0或4.0μg/mL;

S2、向上述南极磷虾油中分别加入4~6ml无水乙醇溶解,加入0.105mol/L NaOH-乙醇溶液2ml,定容到10~25ml,充氮后在5℃层析柜中进行皂化反应3.5h;皂化完成后,加入

0.100~0.105mol/L磷酸-乙醇溶液2~5ml终止反应;两份步骤S1所述南极磷虾油中各试剂的加入量均相同;

S3、混合、离心取上清液,过0.22μm微孔滤膜,分别进行HPLC检测分析;

S4、采用250mm×4.6mm×10μm规格的Hypersil C18色谱柱对虾青素进行分离检测;流动相的流速为0.5~1.0mL/min,检测器为紫外检测器,检测波长为478nm,进样量为5~50μL,柱温为20~30℃;按比例二氯甲烷:甲醇:乙腈:水=5.0:85.0:5.5:4.5,配制溶液A;按比例二氯甲烷:甲醇:乙腈:水=22.0:28.0:45.5:4.5配制溶液B;以A、B为流动相进行梯度洗脱;

洗脱条件:0min~8min,A流动相为100%,B流动相为0%;8min~56min:A流动相从100%降到0%,B流动相从0%升到100%;

S5、得出进样中游离虾青素的含量,得到加标回收率,进而获得南极磷虾油中虾青素含量,具体步骤为:S51、利用液相色谱检分别测得步骤S2得到的两种样品游离虾青素的面积,并利用面积归一化法分别得到总面积,总面积A=A全反式+1.1×A9-顺+1.3×A13-顺其中,A13-顺、A全反式、A9-顺分别为试样溶液中13-顺虾青素、全反式虾青素、9-顺虾青素的峰面积;1.1、1.3分别为9-顺虾青素和13-顺虾青素对全反式虾青素的校正因子;

S52、结合步骤S4所述检测条件下得到的虾青素标准曲线,得到步骤S2得到的两种样品游离虾青素的含量;

所述虾青素标准曲线为Y=99.6569x-5.1469

其中,Y为步骤T1得到的总面积,x为游离虾青素含量;

S53、加标回收率:P=(C2-C1)/C0×100%,其中C2为步骤S2得到的添加有标准品的磷虾油样品中游离虾青素量;C1为步骤S2得到的磷虾油样品中游离虾青素量;C0为虾青素标准品添加量;

S54、利用加标回收率得到南极磷虾油中虾青素含量:

南极磷虾油中虾青素含量:C=C1/P。